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旋毛虫肌幼虫WM5抗原基因的克隆、表达及鉴定

作　者: 夏慧卿
导　师: 刘明远
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 旋毛虫肌幼虫 WM5抗原克隆表达鉴定
分类号: S852.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

旋毛虫病是由旋毛虫(Trichinella spiralis)引起的一种呈全球性分布的人兽共患寄生虫病,可感染人和150多种动物,甚至可致人死亡,严重威胁人民群众的身体健康。本研究利用分子生物学及免疫学技术,分离肌幼虫抗原基因,为旋毛虫病反应原性及特异性诊断抗原基因的筛选及大量制备奠定基础。本研究对免疫筛选出的阳性克隆WM5 cDNA进行了克隆表达。WM5 cDNA编码旋毛虫肌幼虫抗原,全长1315 bp,含有一个1122 bp的完整开放阅读框架(ORF),氨基酸序列第1-45位为信号肽。NCBI BLAST同源性分析表明,与旋毛虫Trichinella spiralis (AF231948)同源性为99%,有3个碱基存在差异,并引起相应的2个氨基酸发生变化。利用PCR技术,从pBluescript-WM5重组质粒中扩增到不含信号肽序列的WM5基因片段,克隆到pMD18-T载体上,序列测定后重组到原核表达载体pET-28a中,用IPTG诱导培养重组表达菌,对表达产物进行SDS-PAGE分析,结果显示,重组菌体裂解产物与对照菌相比出现了一条相对分子量约为37.7 kDa的新条带。免疫琼脂扩散试验显示重组蛋白抗血清与重组蛋白反应形成较强的免疫沉淀带,Western-blotting检测显示,重组抗原与旋毛虫感染60d猪血清发生反应形成强烈的反应带,具有很好的反应原性,从而为旋毛虫病诊断抗原及保护性抗原的筛选及大量制备奠定基础。

全文目录

提要  4-5
英文缩写词表  5-7
引言  7-9
第一篇文献综述  9-32
  综述一关于旋毛虫包囊形成机制的研究进展  9-16
  综述二旋毛虫抗原的研究进展  16-32
第二篇研究内容  32-65
  第一章旋毛虫肌幼虫 WM5 抗原基因的克隆及序列分析  32-48
    1 材料与方法  32-37
    2 结果  37-45
    3 讨论  45-47
    4 小结  47-48
  第二章旋毛虫肌幼虫 WM5 抗原基因重组表达载体的构建及高效表达  48-57
    1 材料与方法  48-53
    2 结果  53-56
    3 讨论  56
    4 小结  56-57
  第三章旋毛虫肌幼虫 WM5 抗原基因重组蛋白的鉴定  57-65
    1 材料与方法  57-61
    2 结果  61-63
    3 讨论  63-64
    4 小结  64-65
结论  65-66
参考文献  66-75
中文摘要  75-77
英文摘要  77-79
致谢  79-80
作者简介  80-82
导师简介  82-84

旋毛虫肌幼虫WM5抗原基因的克隆、表达及鉴定

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