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高效液相色谱—串联质谱测定水产品中五种镇静剂残留方法的研究

作　者: 钱晓东
导　师: 于慧娟
学　校: 上海海洋大学
专　业: 应用化学
关键词: 高效液相色谱-串联质谱水产品安眠酮地西泮及其代谢物
分类号: R155.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

安眠酮、地西泮及其代谢物被违规应用于水产品中,目的是让其在各种环境下长时间保活,品质保鲜,但这些药物对人体健康会形成威胁。农业部235号公告中将安眠酮规定为“禁止使用的药物,在动物性食品中不得检出”,将地西泮规定为“允许作治疗用,但不得在动物性食品中检出的药物”。国内外已有的安眠酮、地西泮及其代谢物的检测方法大多针对人血浆和尿液、畜禽饲料以及猪、牛肉等,但由于水产品基质相对复杂,这些方法均不适用于水产品中安眠酮、地西泮及其代谢物残留的测定。本研究先从介绍安眠酮、地西泮及其代谢物的结构性质着手,简要阐明其药理作用、代谢情况,并举其危害现象;然后对国内外这几种镇静剂的研究成果做了分析归纳,且用简明易于比较的图表形式列出;在借鉴前人经验的基础上,准确地把握了研究方向。通过对水产品中安眠酮残留、水产品中地西泮及其代谢物残留的高效液相色谱-串联质谱测定条件、样品前处理方式的研究,分别建立了“高效液相色谱-串联质谱测定水产品中安眠酮残留”检测方法和“高效液相色谱-串联质谱测定水产品中地西泮及其代谢物残留”检测方法,起草了“高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中安眠酮残留”农业部水产行业标准草案,填补了水产品中安眠酮残留检测技术的空白。起草了一项农业部水产行业标准“高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中安眠酮残留”:样品用正己烷提取2次,适当浓缩,直接过极性硅胶固相萃取柱净化,洗脱液经吹氮浓缩至干,用1:1甲醇-水(体积比)溶解;CAPCELL PAK MGⅡC18(100mm*2.1mm id,3.5μm)为分离柱,以甲醇和0.1%甲酸水溶液作流动相,梯度洗脱;采用电喷雾电离,正离子扫描,选择反应监测,内标法定量。实验结果表明,安眠酮在5～250 ng/mL范围内呈现良好的线性关系:相关系数R2大于0.9990;定量下限1μg/kg,以1、10、50μg/kg这3个水平进行加标回收实验,回收率均大于70%,相对标准偏差均小于15%。此外,本实验还探索了安眠酮在不同环境条件下的稳定性情况。该方法准确度高,重现性好,操作简单,适用范围广泛,应用性较强。运用本研究所建立的测定方法,我们选取了上海市场上代表性较强的高值鱼鳗鱼、鲈鱼和鳜鱼进行取样、处理、测定,目前未发现安眠酮残留。建立了一项检测方法“高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中地西泮及其代谢物残留”:样品用含1%氨水的乙腈提取2次,浓缩,经正己烷去脂、HLB固相萃取柱净化后,减压蒸干,用1:1甲醇-水(体积比)定容。采用CAPCELL PAK MGⅡC18(100mm*2.1mm id,3.5μm)作分离柱,以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱。采用电喷雾电离,正离子扫描,选择反应监测;内标法定量。实验结果表明:4种药物均在5～250 ng/mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数R2均大于0.990;定量下限均可达到1μg/kg;以1、10、50μg/kg这3个水平进行加标回收实验,每种药物的回收率(批内、批间)范围在80.7%～119.0%,相对标准偏差(批内、批间)为1.7%～14.1%。该法高效、灵敏,适合于水产品中地西泮及其代谢物的的定量及确证分析。运用本研究所建立的测定方法,我们选取了上海市场上代表性较强的高值鱼鳗鱼、鲈鱼、鳜鱼进行取样、处理、测定,目前未发现地西泮及其代谢物残留。目前,食品安全形势日益为人们所关注,风险评估也已成为业内的热门话题。本研究的两项成果顺应了时代潮流,为今后的评估工作提供了技术支持!

全文目录

中文摘要  6-8
Abstract  8-13
引言  13-14
第一章高效液相色谱测定五种镇静剂残留方法现状  14-21
  1 五种镇静剂的结构及性质  14-17
    1.1 安眠酮  14
    1.2 地西泮及其代谢物  14-17
  2 高效液相色谱测定五种镇静剂残留方法现状  17-20
    2.1 安眠酮检测技术现状  17
    2.2 地西泮及其代谢物的检测技术现状  17-20
  3 本章小结  20-21
第二章 LC-MS/MS 测定水产品中安眠酮残留量  21-37
  1 材料与方法  21-24
    1.1 实验用水产品  21
    1.2 仪器与试剂  21-22
      1.2.1 仪器与设备  21-22
      1.2.2 试剂  22
    1.3 测定方法  22-24
      1.3.1 样品制备及前处理  22-23
        1.3.1.1 样品制备  22
        1.3.1.2 提取  22
        1.3.1.3 净化  22-23
      1.3.2 液相色谱分析条件  23
      1.3.3 质谱分析条件  23-24
  2 结果与讨论  24-36
    2.1 液相色谱分析条件的研究  24
      2.1.1 色谱柱的选择  24
      2.1.2 柱温的选择  24
      2.1.3 流动相的确定  24
    2.2 质谱分析条件的研究  24-26
      2.2.1 离子源条件的优化和离子碎片的选取  24-25
      2.2.2 离子碎片强度与碰撞能量关系的研究  25-26
    2.3 样品前处理方法的研究  26-29
      2.3.1 提取剂的研究  26-28
        2.3.1.1 提取剂组成的研究  26-27
        2.3.1.2 提取剂用量的研究  27-28
      2.3.2 净化方法的研究  28-29
        2.3.2.1 硅胶柱对安眠酮吸附性能的研究  28
        2.3.2.2 洗脱剂配比及洗脱剂用量的研究  28-29
      2.3.3 定容方式  29
    2.4 方法有效性评价  29-34
      2.4.1 方法选择性评价  30-33
      2.4.2 方法准确度和精密度  33-34
      2.4.3 方法定量限及线性范围  34
    2.5 标样及样品稳定性的研究  34-36
      2.5.1 标准中间溶液稳定性实验  34-35
      2.5.2 药物在样品中的稳定性实验  35-36
    2.6 实际样品测定  36
  3 结论  36-37
第三章 LC-MS/MS 测定水产品中地西泮及其代谢物残留量  37-54
  1 材料与方法  37-40
    1.1 实验用水产品  37
    1.2 仪器与试剂  37-38
      1.2.1 仪器与设备  37-38
      1.2.2 试剂  38
    1.3 测定方法  38-40
      1.3.1 样品制备及前处理  38-39
        1.3.1.1 样品制备  38
        1.3.1.2 提取  38-39
        1.3.1.3 净化  39
      1.3.2 液相色谱分析条件  39
      1.3.3 质谱分析条件  39-40
  2 结果与讨论  40-52
    2.1 液相色谱分析条件的研究  40-41
      2.1.1 色谱柱的选择  40
      2.1.2 流动相和流速的确定  40-41
    2.2 质谱分析条件的研究  41-44
      2.2.1 离子源条件的优化及离子碎片选取  41
      2.2.2 离子碎片强度与碰撞能量关系的研究  41-44
    2.3 样品前处理方法的研究  44-46
      2.3.1 提取方法的研究  44
      2.3.2 净化条件的研究  44-46
    2.4 方法有效性评价  46-52
      2.4.1 方法选择性评价  46-50
      2.4.2 方法准确度和精密度  50-52
      2.4.3 方法定量限及线性范围  52
        2.4.3.1 方法的定量限  52
        2.4.3.2 方法的线性范围  52
    2.5 实际样品测定  52
  3 结论  52-54
结论  54-55
参考文献  55-57
附录Ⅰ  57-58
附录Ⅱ  58-59
致谢  59

高效液相色谱—串联质谱测定水产品中五种镇静剂残留方法的研究

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