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白花蛇舌草DNA指纹图谱与体外抗肿瘤活性的相关性研究

作　者: 于永洲
导　师: 于治国；陈秀洁
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药物分析
关键词: 白花蛇舌草 DNA指纹图谱 体外抗肿瘤活性
分类号: R73-36
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要


白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.)为茜草科一年生植物白花蛇舌草的干燥或新鲜全草。主要含有蒽醌类化合物、三萜类化合物、环烯醚萜苷类化合物及甾醇类等成分，白花蛇舌草在我国分布地域广泛且其伪混品较多、现行鉴别方法落后，本文应用目前较为先进的RAPD技术从基因水平进行白花蛇舌草的真伪鉴别、遗传距离分析，并将分析结果与体外抗肿瘤活性实验结果相结合，对白花蛇舌草道地性的决定因素进行考察，筛选出具有较好抗肿瘤活性的药材产地和用于该产地药材确认的随机引物，为白花蛇舌草的进一步开发利用提供了科学依据。 1．白花蛇舌草的DNA指纹图谱研究 (1)通过琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增，对白花蛇舌草基因组DNA的提取工艺进行了考察，建立了适宜的提取方法—低pH法。 (2)对PCR扩增反应的影响因素进行考察，建立了较佳的反应体系：总反应体积20μL，模板DNA 40ng，Taq DNA聚合酶1.0U，引物0.4μmol/L，dNTP150μmol/L，BSA1.5g/L，10×Buffer 2.0μL，加入灭菌去离子水至20μL。循环参数为：预变性94℃3min；变性94℃1min，复性39℃45s，延伸72℃1min，45个循环；72℃延伸5min。 (3)通过引物筛选，选出16个能产生清晰条带的引物；通过PCR扩增与琼脂糖凝胶电泳，确定了用于真伪鉴别的引物；通过遗传距离分析软件对样品间的遗传距离进行统计分析，证实伪品和真品分为两大类，说明RAPD鉴别真伪是有效、可行的。 2．白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性考察 (1)通过MTT试验，考察了白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性，结果表明：随着药物剂量的增加其抗肿瘤活性增强，药物与HeLa细胞的作用时间越长其作用越强，48h后其抗肿瘤活性基本稳定。

全文目录


中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
第一章 前言  11-21
  1.1 RAPD技术在中药研究中的应用  11-14
  1.2 白花蛇舌草的研究概况  14-18
  1.3 立题目的及依据  18-21
第二章 实验基本方案  21-24
  2.1 实验流程图  21-23
  2.2 主要实验方法  23-24
第三章 白花蛇舌草基因组 DNA的提取  24-39
  3.1 白花蛇舌草药材的收集与处理  24-25
  3.2 实验仪器、试剂与实验用缓冲液  25-27
  3.3 不同部位基因组DNA的提取研究  27-30
  3.4 不同提取方法的比较  30-34
  3.5 不同处理方法的比较  34-37
  3.6 白花蛇舌草及其伪品的基因组DNA的凝胶电泳图谱  37
  3.7 白花蛇舌草及其伪品的基因组DNA的含量及纯度  37-38
  3.8 结论  38-39
第四章 PCR反应条件的优化  39-52
  4.1 PCR反应的基本原理  39-40
  4.2 实验仪器与试剂  40
  4.3 反应物质的优化  40-48
  4.4 循环参数的优化  48-50
  4.5 结论  50-52
第五章 白花蛇舌草真伪鉴别及遗传距离分析  52-61
  5.1 引物的筛选  52-53
  5.2 真伪鉴别  53-54
  5.3 遗传距离分析  54-60
  5.4 结论  60-61
第六章 白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性考察  61-70
  6.1 白花蛇舌草对 HeLa细胞的抑制作用  61-64
  6.2 不同提取方法的体外抗肿瘤活性比较  64-66
  6.3 不同产地品白花蛇舌草体外抗肿瘤活性的比较  66-69
  6.4 结论  69-70
第七章 结果与结论  70-72
附录  72-74
参考文献  74-79
致谢  79-80
个人简历  80

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究 > 治疗实验
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