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白花蛇舌草中熊果酸的提取纯化工艺研究

作　者: 谢艳
导　师: 任其龙
学　校: 浙江大学
专　业: 生物化工
关键词: 白花蛇舌草 熊果酸 溶剂提取 柱层析 MTT
分类号: TQ464
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 330次
引　用: 6次
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内容摘要


熊果酸是一种五环三萜类物质,具有明显的抗肿瘤、抗氧化、抗炎、保肝、降血脂作用。目前较难合成,一般以从生物质内提取为主。本文研究讨论了从白花蛇舌草中分离提纯熊果酸的工艺。 建立了白花蛇舌草提取物中熊果酸的分析方法。采用薄层层析法进行定性分析,分析条件为:以甲苯:乙酸乙酯:冰醋酸=20:4:0.6为展开剂,硅胶G板为固定相,碘蒸气为显色剂。用反相高效液相色谱法进行定量分析,分析条件为:以甲醇:水:冰醋酸=85:15:0.3为流动相,C18柱为固定相,流速为0.6ml/min,进样量为10μl,检测波长为210nm,柱温为30℃。 采用溶剂法粗提熊果酸。以乙醇为提取溶剂,通过单因素实验及正交实验,获得的最佳提取条件是:95%乙醇溶液在回流温度下提取两次,每次1.5h,液固比为8:1。由提取实验测得实验用白花蛇舌草中含熊果酸3.57×10-3（g/g）。而上述条件下熊果酸的提取率可达95%左右,提取物中熊果酸的含量约为2.5%。 用溶剂法对提取后的熊果酸进行初步纯化。先用液固比10（v/m）的石油醚对粗提浸膏进行三次脱脂,再用氯仿以1:1的料液比萃取两次。然后用酸碱沉淀法即通过调节提取物醇溶液的pH值来进一步纯化熊果酸,最佳条件为首先将样品的醇溶液用10%的NaOH溶液碱化至pH11左右,加热,搅拌静置,过滤;将滤液用10%的HCl溶液酸化至pH为2,再用同样酸度的水溶液稀释一倍,静置,过滤,再用水洗沉淀至中性,真空干燥。最后所得产品含量可达36%左右,回收率在72.6%左右。 本文还考察了柱层析精制工艺,通过单因素考察获得的最佳层析条件为以80～120目的硅胶为固定相,流动相为氯仿～甲醇体系,梯度洗脱,洗脱速度以0.8BV/h为宜,洗脱时温度控制在25℃。通过柱层析,产品中熊果酸的纯度可由过柱前的36%提高到65%以上。另外还初步摸索了产品的结晶工艺。 最后对通过MTF法考察了本文得到的产品对细胞K562/ADM增殖抑制作用,发现有明显的细胞毒作用。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
前言  6-7
目录  7-10
第一章 文献综述  10-34
  1．1 白花蛇舌草  10-15
    1．1．1 资源  10
    1．1．2 化学成分  10-14
    1．1．3 药理作用及临床应用  14
    1．1．4 抗癌活性成分的研究  14-15
    1．1．5 展望  15
  1．2 熊果酸  15-32
    1．2．1 结构特征  16
    1．2．2 熊果酸的理化性质  16-17
    1．2．3 熊果酸的生物活性  17-21
    1．2．4 熊果酸的植物来源  21
    1．2．5 熊果酸的提取分离方法  21-25
    1．2．6 熊果酸的分析方法  25-32
  1．3 课题意义  32-34
第二章 熊果酸的分析方法  34-41
  2．1 薄层层析  34-36
    2．1．1 实验材料及仪器  34-35
    2．1．2 实验方法  35
    2．1．3 结果与讨论  35-36
  2．2 HPLC分析  36-40
    2．2．1 实验材料及仪器  36
    2．2．2 色谱分析条件  36-37
    2．2．3 溶液的制备  37
    2．2．4 结果与讨论  37-40
  2．3 本章小结  40-41
第三章 熊果酸的溶剂粗提  41-50
  3．1 仪器与试剂  41-42
  3．2 实验方法  42-44
  3．3 结果与讨论  44-48
    3．3．1 单因素实验  44-47
    3．3．2 正交实验  47-48
  3．4 本章小结  48-50
第四章 熊果酸的初步纯化  50-59
  4．1 实验材料与仪器  50
  4．2 石油醚萃取  50-53
    4．2．1 实验方法  51
    4．2．2 结果与讨论  51-53
  4．3 溶剂萃取  53-54
    4．3．1 实验方法  53
    4．3．2 结果与讨论  53-54
  4．4 沉淀法富集  54-57
    4．4．1 实验方法  54-55
    4．4．2 结果与讨论  55-57
  4．5 本章小结  57-59
第五章 熊果酸的精制  59-74
  5．1 熊果酸的薄层色谱研究  59-61
    5．1．1 实验仪器及试剂  59
    5．1．2 实验步骤  59-60
    5．1．3 实验结果及讨论  60-61
  5．2 柱层析精制熊果酸  61-68
    5．2．1 实验仪器及试剂  61
    5．2．2 实验步骤  61-62
    5．2．3 实验结果及讨论  62-67
    5．2．4 结论  67-68
  5．3 静态吸附考察  68-71
    5．3．1 实验仪器及试剂  68
    5．3．2 吸附平衡  68-70
    5．3．3 吸附速率  70-71
  5．4 动态吸附  71-72
    5．4．1 试剂及仪器  71
    5．4．2 实验方法  71
    5．4．3 结果与讨论  71-72
  5．5 结晶实验  72
  5．6 本章小结  72-74
第六章 药理实验  74-77
  6．1 主要生化试剂与仪器  74-75
    6．1．1 主要生化试剂与药品  74
    6．1．2 仪器  74-75
  6．2 方法  75
    6．2．1 K562/AD细胞株的培养  75
    6．2．2 MTT法观察白花蛇舌草提取物对细胞 K562/ADM增殖抑制的观察  75
  6．3 结果与讨论  75-77
第七章 结论与建议  77-80
  7．1 结论  77-79
    7．1．1 分析方法  77
    7．1．2 提取纯化工艺  77-79
    7．1．3 药理检验  79
  7．2 建议  79-80
参考文献  80-85
致谢  85

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