学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

23种红树植物根际土壤小双孢菌的选择性分离

作　者: 徐小雄
导　师: 洪葵
学　校: 海南大学
专　业: 微生物学
关键词: 红树植物根际土壤选择分离小双孢菌多相分类
分类号: S714
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 11次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

小双孢菌属于链孢囊菌科。为研究红树林土壤中小双孢菌的资源的分布情况,从海南文昌头苑红树林保护区采集23种红树植物的根际土壤,进行小双孢菌的选择性分离。采用超声波处理30 min,120℃干热60 min或100℃干热60 min,1%氯胺-T处理30 min等预处理,平板稀释涂布法(10^-1,10^-2,10^-3涂布于葡萄糖天门冬素培养基（GA）和腐殖酸（HV）两种选择性培养基,两种培养基中均添加复合维生素（0.5 mg/L）、放线菌酮（50 mg/L）、制霉菌素（50 mg/L）和重铬酸钾（50-100 mg/L）。共分离得到199株放线菌,通过培养特征及显微形态观察,归类为链霉菌136株,非链霉菌63株。选择其中7株链霉菌和28株非链霉菌进行了16S rRNA基因序列分析,结果显示其中19株菌为小双孢菌属,7株为链霉菌属,4株为野野村菌属,2株为小单孢菌属,1株为链孢囊菌属,1株为阿萨诺氏菌属,1株为小单孢菌科未定属。其中菌株211020和212030很有可能为小双孢菌属中的新种,菌株210121可能是阿萨诺氏菌属的一个新种,菌株210417、菌株210432、菌株212202可能是野野村菌属的新种,菌株211018可能是小单孢菌科的一个新属。199株放线菌中有64株菌显示了生物活性,活性率为32.2%,其中有抗神经退行性疾病模型Caspase-3的1株,抗小鼠肉瘤细胞HCT-116的9株,抗糖尿病模型（proteintyrosine phosphatase 1B,PTP1B）的7株,抗耐药性金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA）的9株,抗金黄色葡萄球菌ATCC 51650的15株,抗人肝癌细胞SMMC-7721的39株。而且10株菌具有两种生物活性,3株菌具有三种生物活性,其中,小双孢菌212030具有抗Caspase-3和抗金黄色葡萄球菌ATCC 51650两种活性。实验结果表明,对土样采用120℃干热处理60 min和1%氯胺-T处理30 min,结合GA和HV两种培养基分离,均能有效地从红树林根际土壤中选择性分离到小双孢菌,其中GA培养基的分离效果更加好。红树林根际土壤中蕴含着丰富的有生物活性的小双孢菌资源,并存在新种。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
1 前言  9-22
  1.1 小双孢菌属  9-13
    1.1.1 小双孢菌形态和理化特征  9
    1.1.2 小双孢菌的系统发育地位  9-11
    1.1.3 小双孢菌的生态分布  11
    1.1.4 小双孢菌的应用  11-13
  1.2 小双孢菌的选择性分离  13-14
  1.3 红树林介绍  14-15
    1.3.1 红树林及其微生物生态系统  14
    1.3.2 红树林中的微生物新物种  14-15
    1.3.3 红树林放线菌的研究进展  15
  1.4 放线菌系统分类学  15-19
    1.4.1 放线菌系统分类学的简史  15-17
    1.4.2 放线菌的经典分类  17-18
    1.4.3 放线菌的化学分类  18
    1.4.4 放线菌的分子分类  18-19
  1.5 部分已知小双孢菌的多相分类指征  19-21
  1.6 研究目的与意义  21-22
2 材料与方法  22-35
  2.1 实验材料  22-26
    2.1.1 23种红树植物根际土壤样品  22-23
    2.1.2 主要生化试剂  23
    2.1.3 分析软件  23-24
    2.1.4 培养基  24-25
    2.1.5 实验仪器设备  25-26
    2.1.6 PCR引物  26
  2.2 实验方法  26-32
    2.2.1 23种红树根际土壤的理化性质检验  26-27
    2.2.2 小双孢菌的选择性分离、纯化和保藏  27-28
      2.2.2.1 土壤样品预处理  27
      2.2.2.2 小双孢菌选择性分离培养基的制备  27
      2.2.2.3 涂布、培养和挑菌  27
      2.2.2.4 菌种保藏  27-28
      2.2.2.5 菌株的编号  28
    2.2.3 分离菌株的分群  28
    2.2.4 放线菌的16S rRNA基因序列分析  28-31
      2.2.4.1 菌体的培养  28
      2.2.4.2 放线菌基因组DNA的提取  28-29
      2.2.4.3 PCR扩增反应体系和条件  29
      2.2.4.4 PCR产物切胶回收纯化  29-30
      2.2.4.5 纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接  30
      2.2.4.6 连接产物的转化(布伦特,1992)  30-31
      2.2.4.7 菌落PCR验证转化结果  31
    2.2.5 克隆子送测序  31
    2.2.6 16S rRNA基因序列系统发育分析  31-32
  2.3 多相分类鉴定  32-35
    2.3.1 培养特征鉴定  32
    2.3.2 生理生化鉴定  32-33
    2.3.3 化学鉴定  33-35
      2.3.3.1 细胞壁氨基酸分析  33
      2.3.3.2 全细胞糖分析  33-34
      2.3.3.3 其它化学鉴定  34-35
3 结果与分析  35-54
  3.1 23种红树根际土壤样品的理化指标  35-36
  3.2 总的分离结果  36-40
    3.2.1 10种红树根际土壤的总的分离结果  36-37
    3.2.2 分离菌株中的链霉菌、非链霉菌和小双孢菌  37-38
    3.2.3 不同的分离方法的分离效果  38-39
    3.2.4 具有生物活性的菌株  39-40
  3.3 菌株的16S rRNA基因测序  40-47
    3.3.1 16S rRNA基因的PCR扩增、纯化、连接和转化  41
    3.3.2 35株菌的16S rRNA基因序列的测序结果  41-42
    3.3.3 19株小双孢菌的16S rRNA基因序列分析  42-47
  3.4 Microbispora sp.211020和Microbispora sp.212030的鉴定  47-51
    3.4.1 培养特征  47-50
    3.4.2 菌株211020和212030的部分培养特征和理化特征  50-51
  3.5 Asanoa sp.210121的鉴定  51-54
    3.5.1 菌株210121的16S rRNA基因序列分析  51-52
    3.5.2 菌株210121的培养特征和化学鉴定  52-54
4 讨论  54-58
  4.1 土壤理化参数对放线菌分离效果的影响  54
  4.2 从红树林土壤选择性分离小双孢菌  54-55
  4.3 分离菌株中的新种  55-56
  4.4 选择性分离小双孢菌的活性  56-58
5 结论  58-59
  5.1 选择性分离小双孢菌的结果  58
  5.2 选择性分离小双孢菌的方法  58
  5.3 选择性分离得到的小双孢菌新种  58
  5.4 选择性分离得到的小双孢菌的活性  58-59
参考文献  59-68
致谢  68

23种红树植物根际土壤小双孢菌的选择性分离

内容摘要

全文目录

相似论文