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抗人脑钠肽单克隆抗体的研制

作　者: 徐海祥
导　师: 杨笛
学　校: 南京医科大学
专　业: 心血管内科
关键词: 脑钠肽单克隆杭体
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 38次
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内容摘要

背景：流行病学调查显示，心力衰竭在成人住院病因中排名第四，严重危害着人类健康。自脑钠肽(brain natriuretic peptide，BNP)被发现以来至今，BNP在心力衰竭、急性冠脉综合征等疾病中的诊断价值、判断预后价值等已经得到了广大学者的认可，美国心脏病学会、欧洲心脏病学会也分别将BNP检测列入其心力衰竭诊疗指南，BNP有望成为心力衰竭诊断、危险分层、预后评判的标记物。目的：建立分泌BNP单克隆抗体杂交瘤细胞株，制备抗人BNP单克隆抗体，为建立BNP检测方法及其临床应用提供基础。方法：合成的BNP与牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)以碳化二乙胺(EDC)法偶联，制备BNP-BSA完全抗原。将BNP-BSA(100μgBNP)与等体积福氏完全佐剂混合后，腹腔注射Balb／c小鼠初次免疫，3周后以BNP-BSA与等体积福氏不完全佐剂混合继续加强免疫小鼠，共加强免疫3次，每次间隔3周。免疫完成后2周对小鼠采血，间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法检测小鼠血清BNP抗体滴度。至融合前3天以无佐剂的100μg完全抗原再次加强免疫。约1×10~8个免疫小鼠脾细胞在聚乙二醇作用下，与2-5×10~7骨髓瘤细胞SP2／0融合。融合后细胞先后培养于次黄嘌呤、氨基喋呤、胸腺嘧啶核苷(hypoxanthine、aminopterin、thymidine，HAT)以及次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷(HT)选择性培养液。培养10天后间接ELISA法检测细胞培养上清BNP抗体，筛选出BNP抗体阳性的杂交瘤细胞以有限稀释法亚克隆培养。连续进行三次亚克隆，筛选出最终呈单克隆生长、稳定分泌BNP抗体的细胞株，选取一株行染色体核型分析。扩大培养分泌BNP单克隆抗体的细胞株，以5×10~5-1×10~6个细胞／只接种于一周前腹腔注射0.5ml／只液体石蜡油的Balb／c小鼠。接种后7天开

全文目录

论文摘要(中文)  3-5
论文摘要(英文)  5-8
缩略语  8-9
引言  9-11
第一部分分泌BNP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立  11-23
  材料和方法  11-18
  结果  18-23
第二部分脑钠肽单克隆抗体的制备及鉴定  23-32
  材料和方法  23-28
  结果  28-32
讨论  32-38
结论  38-39
参考文献  39-43
致谢  43-44
综述  44-54
知识产权申明  54-55
论文独创性声明、论文使用授权声明  55

抗人脑钠肽单克隆抗体的研制

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