学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

基因重组糖蛋白-rhEPO的质谱分析及麦胚凝集素亲和色谱行为的考察

作　者: 卢庄
导　师: 蔡耘；钱小红
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 药物分析
关键词: 重组人促红细胞生成素(rhEPO) 糖蛋白质谱一级结构麦胚凝集素
分类号: R91
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 79次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

生物工程产品重组人促红细胞生成素(rhEPO)是一种糖蛋白，其最主要的功能是促进红细胞的生成，在临床上主要用于治疗肾性贫血和一些并发性贫血。质谱是一种高灵敏度、高特异性的检测手段，在化学、生物、医药等领域应用广泛。本论文以较高浓度的rhEPO原液为研究对象，建立了生物质谱研究rhEPO一级结构的系列方法，包括分子量、唾液酸含量以及N-糖含量等糖基化性质的测定方法，并用于四种国产rhEPO样品的分析；在此基础上优化酶切条件，使测定的肽质量指纹谱(PMF)的覆盖率均达到98％，成功鉴定了四种样品中的全部N-糖基化位点以及对分子中两对二硫键进行了结构确证，此外还对四种产品在O-连接糖型及N-连接糖型上的区别做了初步探讨，为建立基于质谱的快速高灵敏度的检测方法奠定了一定的基础，也为该类药物的质量评价提供了依据。麦胚凝集素是一种可以特异性与β1-4或β1-2连接的N-乙酰葡萄糖胺及唾液酸亲和作用的一种凝集素，在蛋白质组学领域中广泛应用于复杂体系中糖蛋白及糖肽的亲和提取，达到简化体系、提高鉴定成功率的目的。本论文考察了将其用于简单蛋白混合体系中rhEPO亲和提取的可行性。实验结果表明，麦胚凝集素与rhEPO糖链有特异的亲和作用，可以在简单的蛋白混合体系中将其富集。但进一步用于酶切后糖肽提取时，发现麦胚凝集素对很多肽段有明显的降解作用，导致体系复杂程度显著提高，对糖肽的降解则导致随后鉴定的失败。本论文分别用四种标准蛋白不同酶切后的肽段混合物对该实验现象进行了验证，并对过柱后肽段降解的规律进行了一定的统计分析。肽段经麦胚凝集素亲和提取后产生降解的现象是对目前应用广泛的凝集素亲和提取复杂体系中糖肽方法的一种挑战。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-10
第一章引言  10-14
第二章糖蛋白rhEPO一级结构的质谱分析  14-29
  2.1 概述  14
  2.2 材料与方法  14-17
    2.2.1 实验路线  14-15
    2.2.2 仪器与试剂  15
    2.2.3 实验方法  15-17
      2.2.3.1 分子量、唾液酸含量及糖含量测定方法的建立  15-16
      2.2.3.2 肽质量指纹谱、N-连接糖基化位点及二硫键定位测定方法的建立  16
      2.2.3.3 N-连接糖型及O-连接糖型比较性分析方法的建立  16-17
  2.3 结果与讨论  17-28
    2.3.1 rhEPO分子量及唾液酸含量测定  17-18
    2.3.2 rhEPO肽质量指纹谱图测定及二硫键定位分析  18-22
    2.3.3 rhEPO糖含量测定及N-连接糖基化位点鉴定  22-25
    2.3.4 rhEPO的O-连接糖型的分析及N-连接糖基化微观不均一性的初步分析及比较  25-28
  2.4 小结  28-29
第三章麦胚凝集素亲和色谱富集糖肽行为的研究  29-41
  3.1 概述  29
  3.2 材料与方法  29-32
    3.2.1 实验路线  29-30
    3.2.2 仪器与试剂  30-31
    3.2.3 实验方法  31-32
      3.2.3.1 不同酶切肽混合物样本的制备  31
      3.2.3.2 WGA亲和提取蛋白混合物中的rhEPO  31-32
      3.2.3.3 WGA亲和提取肽段混合物中糖肽  32
  3.3 结果与讨论  32-40
    3.3.1 WGA亲和富集糖蛋白rhEPO特异性考察  32-33
    3.3.2 WGA亲和富集rhEPO酶解肽段混合物中的糖肽  33-35
    3.3.3 不同酶解肽段混合物过WGA亲和柱后产生的变化  35-39
    3.3.4 WGA对rhEPO不同糖链亲和特异性的研究  39-40
  3.4 小结  40-41
结语  41-42
参考文献  42-46
致谢  46-47
在读期间发表的论文  47-49
肤类兴奋剂检测技术进展  49-55

基因重组糖蛋白-rhEPO的质谱分析及麦胚凝集素亲和色谱行为的考察

内容摘要

全文目录

相似论文