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呼吸道合胞病毒M_(2-1)基因的转染和表达对人肺腺癌PAa细胞体内外生长行为的影响

作　者: 杜玉国
导　师: 陈杭薇
学　校: 第三军医大学
专　业: 呼吸内科学
关键词: 呼吸道合胞病毒 M2-1基因 PAa细胞转染表达生长影响
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

人类呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus, RSV）是有包膜的非节段性单股负链RNA病毒，属副粘病毒家族中的肺炎病毒属，是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的重要病原。近年来发现RSV可以感染免疫力低下的成年人及老年人。本实验室应用RT-PCR技术从肺癌手术标本中扩增出RSV N基因片段，阳性率为17.3%，对照组为0，同时和标本中K-ras基因突变的检测相比，二者具有显著的一致性。提示RSV可能与肺癌的发生发展存在一定关系。M2-1基因全长595个核苷酸，具有保守性，编码22KD的蛋白，M2-1蛋白是RSV区别于其他副粘病毒所特有的一种非糖基化结构蛋白，目前研究证实M2-1蛋白与病毒的衣壳成分有关，同时M2-1蛋白具有抑制多聚酶终止于基因终止信号和跨过基因间区继续转录的功能，是基因连接处转录通读不可缺少的因子，被称为转录延长因子。M2-1蛋白在病毒的复制和调节过程中起重要的作用。因此我们推测：作为调控基因的M2-1基因对宿主细胞的增殖可能产生一定影响。我们在M2-1基因真核载体构建成功的基础上，将含有M2-1 基因cDNA片段的PXJ-41质粒转染PAa细胞，并观察其对PAa细胞体内外生物学行为的影响。本研究的目的：.观察转染后PAa细胞体内外生长的变化，为进一步探讨RSV对肺癌细胞可能的分子作用机制提供依据。方法: 1.对含有M2-1基因cDNA片段的重组真核质粒PXJ-41/M2-1进行<WP=9>酶切鉴定；2.转染肺腺癌PAa细胞；3.运用RT-PCR、Western blot、免疫荧光等方法检测M2-1基因的表达；4.通过MTT生长曲线、流式细胞光度术、集落形成试验、酶消化法、裸鼠接种等技术，观察人肺腺癌PAa细胞体内外生长变化。结果：1. PXJ-41/M2-1经双酶切,产生620bp大小片段；2.RT-PCR扩增M2-1基因可见620bp清晰的条带； 3.Western blot检测转染M2-1基因的PAa细胞，于22KD处可见特异性条带；4.M2-1基因表达的PAa/M2-1细胞生长速度加快；5.PAa/M2-1细胞集落形成率增高，且集落细胞数增多；6.PAa/M2-1细胞贴壁能力下降；7.PAa/M2-1细胞S期细胞数减少，G２/M期增加；8.PAa/M2-1细胞成瘤时间晚，但生长速度加快,成瘤性及转移性无明显差别,瘤组织由腺癌向鳞癌分化，细胞分化程度较差。结论：1. M2-1基因在PAa细胞内转染成功并获表达；2. M2-1蛋白促进PAa细胞生长，细胞粘附功能下降；3.肺腺癌细胞有向鳞癌分化的趋势，机制不明；4.为进一步研究M2-1基因与肺癌的关系奠定了基础。

全文目录

英文缩写一览表  3-5
英文摘要  5-8
中文摘要  8-10
论文正文  10-62
  前言  10-11
  材料与方法  11-25
  实验结果  25-29
  讨论  29-31
  结论  31-32
  致谢  32-33
  照片  33-45
  参考文献  45-48
  文献综述  48-55
  参考文献  55-62
  研究生期间发表论文  62

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