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肿瘤细胞对人树突状细胞生成和功能的影响及机理初探

作　者: 李春昭
导　师: 韩英
学　校: 中国人民解放军军医进修学院
专　业: 消化内科学
关键词: 单个核细胞来源树突状细胞肿瘤细胞免疫逃逸肿瘤免疫
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

树突状细胞(dendritic cell，DC)是广泛存在于动物和人体内的一类形态、结构及功能特异的抗原呈递细胞(antigen presenting cell，APC)。体内、外的各种实验均已证实，DC具有诱导初始型免疫应答的独特功能，是体内最重要的抗原呈递细胞。在抗肿瘤免疫方面发挥着重要的作用。组织活检发现，肿瘤组织中DC的存在与肿瘤患者的预后相关——肿瘤组织中DC的浸润常提示患者预后良好。但既往的研究还表明，肿瘤组织中DC的功能常低下，不能有效地活化体内特异性CTL，达到抗肿瘤免疫的目的。然而，肿瘤组织中DC的数量及功能缺陷的具体机制尚不明确。为探讨肿瘤病人DC功能缺陷的机制，我们观察了肿瘤细胞对人外周血单个核细胞来源树突状细胞的生成及功能影响的情况，并对其中机理作了初步探讨。本实验用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)体外培养外周血单个核细胞来源DC。培养体系中加入人肝癌细胞系(H7402)，结肠癌细胞系(HCT-8)及正常人军医进修学院硕士学位论文骨髓基质细胞系（HFCL）的培养上清液，正常培养体系为对照。应用流式细胞术检测 DC的细胞表面标志及吞噬功能；通过‘H－TdR 掺人法检测DC刺激同种异体T淋巴细胞活化的能力。实验结果显－示，在含有 H7402和 HCTE两种肿瘤细胞培养上清液的培养组中，表达DC特异性标志CD la的细胞量明显减少，共刺激分子CD86及 MHC－11类抗原分子HLA－DR的表达水平也有下降。然而，加 HFCL 培养上清液组DC无明显变化。在DC成熟特异性标志CD83的表达量上，培养第 5天时，H7402和 HCT－8组细胞高于对照组及 HFCL 组；经TNF－口诱导M。DC成熟，在培养第7天时，对照组及HFCL 组细胞的 CD83表达水平明显增高，而H7402和 HCT－8组CD83阳性比例并未增加，同时阳性率一直低于对照及HFCL组水平。此外，肿瘤细胞培养上清液处理组DC对葡聚糖（dextran）的吞噬功能下降；与同种异体T淋巴细胞混合培养实验结果表明，对同种异体T淋巴细胞刺激活性较低。实验结果说明，肿瘤细胞培养上清液处理组DC的数量及成熟过程发生了改变，DC过早成熟，且对 TNF－口的诱导成熟作用无反应性。H7402和 HCT－8细胞培养上清液中的某些物质使DC吞噬及抗原处理功能下降，低表达CD86和 HLA－DR分子，不能有效刺激T淋巴细胞增殖，从而抑制特异性CTL 的活化，甚至造成T细胞对肿瘤细胞的耐受。这可能是肿瘤逃避机体免疫监视作用的机制之一。随后，我们应用RT－PCR技术对肿瘤细胞进行了免疫抑制相关。因子mRNA的检坝，结果发现H7402和 HCT－8两种月瘤细胞均有较高的 TGF－6；和 VEGF表达。提示肿瘤细胞培养上清液中可能含有这些免疫相关抑制因子。H7402和HCT－8细胞培养上清液使DC数量减少，成熟过程改变，功能低下，这是否与 VEGF和 TGF－6；等 4 军医进修学院硕士学位论文因子有关，我们又用 TGF－D；和 VEGF纯品单独加入培养体系中进行了观察。实验结果表明，这两种细胞因子的单独加入对外周血单个核细胞来源DC生成及功能无明显的影响，说明肿瘤细胞对 MODC生成和功能的影响不是单一因素所为，肿瘤上清液对DC生成和功能的影响是通过分泌多种免疫相关因子协同作用来实现的。通过本研究的实验观察，我们认为肿瘤细胞通过分泌多种免疫相关抑制因子，这些因子共同作用来抑制DC的生成，改变DC 的成熟过程，抑制DC表达高水平的MHC分子及共刺激分子，使DC 不能有效激发机体T细胞兔疫反应，这是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一。

全文目录

英文缩略词  4-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
前言  12-16
第一部分外周血单个核细胞来源的树突状细胞生物学特性的研究  16-28
  一、分离、分化和扩增  18-19
  二、 DC的一般生物学特性  19-23
  三、 DC的功能  23-26
  四、讨论  26-27
  五、小结  27-28
第二部分肿瘤细胞对DC分化成熟的影响  28-38
  一、肿瘤细胞对DC体外生成的影响  30-32
  二、肿瘤细胞对DC功能的影响  32-35
  三、讨论  35-37
  四、小结  37-38
第三部分肿瘤细胞对DC分化成熟影响机理的初探  38-47
讨论  47-52
总结  52-53
参考文献  53-58
综述  58-70
鸣谢  70

肿瘤细胞对人树突状细胞生成和功能的影响及机理初探

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