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阿托伐他汀对培养内皮细胞ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达的影响

作　者: 李占海
导　师: 肖传实；杨志明
学　校: 山西医科大学
专　业: 心血管内科学
关键词: 动脉粥样硬化黏附分子他汀类药物 TNF-α
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

背景和目的由动脉粥样硬化(Atherosclerosis, As)引起的心血管疾病是危害人类健康的常见病、多发病,研究As的发病机理及其防治对策是当今医学领域的重要课题之一。Ross认为As是一种由各种损伤因素引起的慢性增生性炎症,但确切机制尚未完全阐明。血管内皮细胞功能障碍被认为是As发病的早期关键环节。而血管内皮细胞与白细胞和单核细胞等炎症细胞的黏附是As最早的细胞行为之一。细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)是存在于内皮细胞表面的一种重要的黏附分子,可促进白细胞向内皮细胞的黏附,是As发生的始动环节。而炎症因子如TNF-a被认为在诱导血管内皮细胞表达粘附分子,促进白细胞向内皮细胞滚动、粘附及内皮下移行等整个As发生、发展过程中起到了关键性的作用。他汀类药物的降脂作用、稳定斑块作用等已逐渐被人们认识。而其非降脂依赖性的抗炎作用近来成为心血管领域的研究热点,但其具体抗炎机制不十分明了。大量研究集中在他汀类药物通过减少病灶中巨噬细胞数量、抑制MMP基因转录、抑制核因子KB活性等机制下调MMP、TF、及IL-6等多种细胞因子的表达上。对内皮细胞的研究较少,多集中在内皮功能如NOS等方面,对内皮细胞中黏附分子表达的影响研究近年才见报道。而第三代他汀类药物-阿托伐他汀对血管内皮细胞VCAM-1和ICAM-1在基因水平表达的影响研究更少。本实验通过体外培养的人脐静脉内皮细胞,采用RT-PCR方法,观察炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对VCAM-1和ICAM-1mRNA表达的影响以及第三代他汀药物-阿托伐他汀对上述过程的干预作用,以了解As的发病机理,探讨阿托伐他汀抗As的可能机制。第一部分TNF-α诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1mRNA的表达方法无菌培养人脐静脉内皮细胞,采用形态学及抗VⅢ因子抗体免疫荧光染色行内皮细胞的鉴定。选择生长良好的第2-5代细胞用于实验。分为(1)对照组:RPMI1640培养基;(2)TNF-α组1:包括不同剂量的TNF-α(10μg/L, 20μg/L, 30μg/L, 40μg/L)培养细胞48h;(3)TNF-α组2:TNF-α30μg/L培养细胞不同的时间(6, 12, 24, 48, 72h)。各培养瓶中的细胞,经药物干预达相应时间后,采用LDH试剂盒测各组培养上清液中LDH的活性,最后收集细胞,半定量RT-PCR测定黏附分子mRNA的表达。结果1.正常细胞生长良好,呈鹅卵石样镶嵌排列,细胞透明度大,轮廓不清。荧光免疫组化染色法,可检测到培养的人脐静脉内皮细胞的VⅢ因子相关抗原为阳性。2.加入TNF-α后细胞粗糙,轮廓增强,细胞内有许多发亮的颗粒,且各浓度组的LDH活性都显著高于对照组(P<0.05)。表明TNF-α有直接的细胞毒作用。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
第一部分 TNF-α诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞血管细胞粘附分子-1和细胞间粘附分子-1 的表达  9-20
  1.1 前言  9
  1.2 材料与方法  9-13
  1.3 结果  13-15
  1.4 讨论  15-17
  1.5 结论  17-18
  参考文献  18-20
第二部分阿托伐他汀对于 TNF-α诱导的培养内皮细胞血管细胞粘附分子和细胞间粘附分子-1 表达的抑制作用  20-28
  2.1 前言  20-21
  2.2 材料与方法  21-22
  2.3 结果  22-24
  2.4 讨论  24-25
  2.5 结论  25-26
  参考文献  26-28
附图  28-34
综述  34-39
个人简介  39-40
致谢  40

阿托伐他汀对培养内皮细胞ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达的影响

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