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饲料中喹烯酮的检测方法与鸡粪中喹烯酮及其代谢物的鉴定研究

作　者: 张丽芳
导　师: 薛飞群
学　校: 中国农业科学院
专　业: 基础兽医学
关键词: 喹烯酮高效液相色谱法饲料代谢物液相色谱串联质谱法
分类号: S859.84
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

自二十世纪四十年代以来,喹噁啉—1,4—二氧类化合物作为一类有效的抗菌剂,被广泛用于兽药领域,主要的代表性药物有喹乙醇（olaquindox）和卡巴氧carbadox)。这类药对畜禽有明显的促进生长和抗菌作用。近年来,由于研究表明喹乙醇和卡巴氧具有潜在的致癌危险性而被欧盟禁用于饲料中。喹烯酮（化学名:3-甲基-2-肉桂酰基-喹噁啉-1,4-二氧化物）是这类药物的新成员,是由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所研制开发的我国具有自主知识产权的一类饲料添加型新兽药。与前两者相比,它具有高效、低毒和添加量少等优点。这对于养殖业特别是畜禽出口乃至人体健康,都具有十分重要的意义。本项研究内容由两个部分组成:饲料中喹烯酮的分析与鸡粪中喹烯酮及其代谢物的鉴定。建立了一种简单快速、专属性强和灵敏度高的反相高效液相色谱法测定饲料中喹烯酮的含量,以便于合理使用喹烯酮。饲料用乙腈提取,色谱柱:Diamonsil钻石C₁₈（4.6×250,5μ）;流动相:乙腈—水（体积比:45∶55）,流速为1.0ml/min,检测波长为380nm,柱温30℃。收集了上海、北京和四川的多个乳猪和乳鸡饲料进行干扰试验研究。结果表明喹烯酮的质量在0.04～0.6μg范围内与峰面积呈良好线性关系,γ²=0.9999,在40mg/kg、80mg/kg、200mg/kg高中低三个不同添加浓度下样品的回收率分别为89.42%、96.20%、98.83%。为了鉴定鸡粪中喹烯酮及其代谢物,首先采用化学合成法合成制备了可能的代谢物。以喹烯酮作反应原料,低亚硫酸钠（保险粉）作为还原剂,通过薄层色谱法（TLC）跟踪反应过程,合成制备得到脱二氧喹烯酮;以喹烯酮为反应原料,三氯化磷为还原剂,合成得到两单氧喹烯酮的混合物,通过柱层析分离得到纯化合物:1—单氧喹烯酮和4—单氧喹烯酮;以苯并呋咱为起始原料,与乙酰乙酸乙酯反应后,经保险粉还原,最终水解制备得到3—甲基—喹噁啉—2—羧酸。运用红外（IR）、紫外（UV）、核磁氢谱（¹HNMR）和电喷雾质谱（ESI-MS）对合成得到的化合物进行了结构认证。采用液相色谱串联质谱法对鸡粪中喹烯酮及其代谢物进行了鉴定。试验用一月龄健康黄羽鸡6只,雌雄对半,以40mg/kg的剂量单次灌胃给药,收集给药后0～24小时内的粪便,采用两种样品前处理方法,高效液相色谱联用三重四极杆串联质谱技术分离鉴定鸡粪中喹烯酮及其代谢物。运用串联质谱全扫描、子离子扫描等多种数据采集模式并结合定向合成的代谢物来确证代谢物的化学结构。试验结果表明,鸡粪便中除了存在原形药物喹烯酮、前期报道过的代谢物脱二氧喹烯酮和3—甲基喹噁啉—2—羧酸外,还存在两个首次发现的新的代谢产物:1—单氧喹烯酮和4—单氧喹烯酮。此方法为进一步深入研究喹烯酮的代谢奠定了坚实的基础。

全文目录

第一章文献综述与引言  11-20
  1.1 引言  11
  1.2 喹烯酮的研究  11-16
    1.2.1 喹烯酮的物理化学性质  11-12
    1.2.2 喹烯酮的药理学研究  12-13
    1.2.3 喹烯酮的毒理学研究  13-14
    1.2.4 喹烯酮的药代动力学研究  14-15
    1.2.5 喹烯酮及其代谢物的检测方法  15-16
  1.3 电喷雾液质联用技术在代谢物鉴定研究中的应用  16-18
    1.3.1 电喷雾电离技术的发展  16
    1.3.2 电喷雾电离的原理  16-17
    1.3.3 电喷雾液质联用技术在代谢物鉴定研究中的应用  17-18
  1.4 本论文研究内容与意义  18-20
第二章饲料中喹烯酮的检测方法  20-26
  2.1 引言  20
  2.2 实验部分  20-21
    2.2.1 材料  20
    2.2.2 色谱条件  20-21
    2.2.3 样品前处理  21
  2.3 方法认证与结果  21-24
    2.3.1 标准曲线与检测限  21
    2.3.2 精密度  21-22
    2.3.3 稳定性试验  22
    2.3.4 回收率  22-23
    2.3.5 专属性  23-24
    2.3.6 模拟样品测定  24
  2.4 讨论  24-25
  2.5 实验小结  25-26
第三章喹烯酮代谢物的合成与结构确证  26-42
  3.1 引言  26-27
  3.2 实验部分  27-29
    3.2.1 材料  27
    3.2.2 代谢物的合成  27-28
    3.2.3 合成代谢物的分析  28-29
  3.3 结果与讨论  29-41
    3.3.1 化合物 MA的确证  29-31
    3.3.2 化合物 MB和 MC的确证  31-37
    3.3.3 化合物 MD的结构确证  37-40
    3.3.4 电喷雾质谱分析探讨  40
    3.3.5 代谢物合成监测的探讨  40-41
  3.4 实验小结  41-42
第四章鸡粪中喹烯酮代谢物的鉴定  42-52
  4.1 引言  42
  4.2 实验部分  42-44
    4.2.1 材料  42-43
    4.2.2 给药与采样  43
    4.2.3 样品前处理  43
    4.2.4 LC-MS/MS分析  43-44
  4.3 结果与讨论  44-51
    4.3.1 鸡粪便中代谢物的鉴定  44-49
    4.3.2 质谱解析探讨  49
    4.3.3 鸡粪样品前处理的选择  49
    4.3.4 色谱条件的选择  49-50
    4.3.5 质谱裂解碎片探讨  50
    4.3.6 结肠造口术分别收集鸡的尿液和粪  50
    4.3.7 喹烯酮在鸡体内可能的代谢途径的推测  50-51
  4.4 实验小结  51-52
第五章全文结论  52-53
参考文献  53-57
致谢  57-58
作者简历  58

饲料中喹烯酮的检测方法与鸡粪中喹烯酮及其代谢物的鉴定研究

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