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茶毛虫NPV基因组部分序列分析和含东亚钳蝎毒素基因重组HearSNPV的构建

作　者: 聂婷婷
导　师: 张传溪
学　校: 浙江大学
专　业: 农业昆虫与防治
关键词: 茶毛虫核型多角体病毒 p24 rr1 lef1 多角体蛋白基因序列分析分子进化重组杆状病毒蝎子毒素
分类号: S435.711
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

茶毛虫(Euproctis pseudoconspersa Strand)又称茶毒蛾,属鳞翅目毒蛾科,主要分布于我国湖北、福建、浙江、广西、贵州和安徽等省以及亚洲的日本和印度等国,是茶树的主要害虫之一。茶毛虫核型多角体病毒(Euproctispseudoconspersa nucleopolyhedrovims简称EupsNPV)是自然界控制茶毛虫的重要生物因子,多年来作为一种病毒杀虫剂在我国已经被推广使用,在茶毛虫的生物防治过程中取得了良好的社会和经济效益,具有很大进一步开发应用的潜力。本研究采用分子生物学技术,提取病毒的基因组DNA,通过随机克隆,构建了其基因组的部分质粒文库,克隆了部分基因组DNA片段,测定和分析了几个相关基因的核苷酸序列,从基因水平确定了该病毒与其它杆状病毒的亲缘关系。主要结果如下: 克隆和测定了茶毛虫核型多角体病毒(EupsNPV)全长5942bp的EcoRI-XhoI基因组DNA片段。序列分析表明该片段包含5个完整的开放阅读框(ORF),分别编码P24、Rr1、38.7K、Lef1和Ep-ld124。通过对上述5个基因与其它已知杆状病毒的同源基因的分析比较,以及对P24、Rr1和Lef1的分子进化树分析,表明EupsNPV是一种与已知杆状病毒都有较大差异的病毒种类,属于NPV Ⅱ组病毒。结果还表明EupsNPV与茶尺蠖(Ectropis obliqua)核多角体病毒(EcobSNPV)的亲缘关系最为接近。克隆了EupsNPV多角体蛋白基因(ph)及其旁侧的920nt序列。ph基因开放阅读框共有738bp,可编码246个氨基酸的多肽。预计编码的蛋白质分子量在28.9KD左右。分析多角体基因的启动子序列,结果显示,在编码区起始密码子ATG上游有一个富含AT的启动子区,在起始密码子ATG上游-52bp处有杆状病毒晚期启动子基序ATAAG,在ph基因翻译终止密码子下游25nt和80nt处各有一个polyA加尾信号AATAAA。EupsNPV ph基因ATG-52bp处14bp保守序列为CCAATAAGTATTTT。第一个核苷酸C与其它19种ph基因在此位置的碱基(A或T)不同。昆虫选择性神经毒素蛋白是作用于昆虫神经系统的一种蛋白类毒素。被

全文目录

中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
第Ⅰ部分：文献综述  12-31
  第一章杆状病毒杀虫剂的研究进展  12-23
    1.杆状病毒及其研究应用  12-13
    2.杆状病毒防治害虫的机理  13
    3 杀虫剂的后效作用  13-15
    4 杆状病毒杀虫剂的缺点  15
    5 重组杆状病毒杀虫剂的研究进展  15-23
  第二章杆状病毒杀虫剂的生物安全性  23-27
    1 杆状病毒的生物安全性  23-24
    2 重组杆状病毒杀虫剂的生物安全性  24-27
  第三章茶毛虫核型多角体病毒的研究进展  27-31
    1 研究背景  27
    2 研究进展  27-31
第Ⅱ部分：茶毛虫NPV部分基因组序列的分析  31-47
  第四章 EupsNPV EcoRI-XhoI 5.9 kb片段序列分析  31-41
    1 材料与方法  31-33
    2 结果与分析  33-38
    3 讨论  38-41
  第五章茶毛虫核型多角体病毒多角体蛋白基因(ph)的序列分析  41-47
    1 材料与方法  41-43
    2.结果与分析  43-46
    3 讨论  46-47
第Ⅲ部分：含蝎子毒素基因棉铃虫HearNPV的构建  47-57
  第六章含东亚钳蝎毒素基因的重组HearSNPV的构建  47-57
    1 材料  48-49
    2 方法  49-55
    4 讨论  55-57
结论  57
本研究的创新点  57-58
参考文献  58-62

茶毛虫NPV基因组部分序列分析和含东亚钳蝎毒素基因重组HearSNPV的构建

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