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抗CD20嵌合抗体的研制
作 者: 师明磊
导 师: 陈惠鹏;胡显文
学 校: 军事医学科学院
专 业: 微生物与生化药学
关键词: 非霍奇金淋巴瘤 CD20 单克隆抗体 嵌合抗体
分类号: R943
类 型: 硕士论文
年 份: 2005年
下 载: 105次
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内容摘要
非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)是一种常见的血液系统恶性肿瘤,死亡率较高。传统化疗药物对之有一定疗效,但存在较严重的副作用。针对B淋巴瘤细胞和B淋巴细胞表面CD20抗原的单克隆抗体治疗NHL取得了较好的效果。抗CD20嵌合抗体与CD20抗原结合以后,能够通过引发凋亡、ADCC、CDC等作用专一性的杀灭B淋巴瘤细胞和B淋巴细胞,而对其他正常组织无不良影响。副作用很小。本实验构建表达了抗CD20嵌合抗体并对其生物学活性进行了初步鉴定。根据相关文献设计合成轻、重链可变区序列; 提取健康B细胞RNA,通过RT-PCR得到轻、重链恒定区序列。运用重叠延伸PCR,连接可变区与恒定区,再将测序正确的轻、重链基因连接至pIRES双表达载体。将质粒以阳离子脂质体转染CHO细胞,ELISA挑选阳性克隆,共获得7株表达较高的克隆,表达量约为2.13mg/L。扩大培养阳性克隆1B3,收获上清,以蛋白A进行亲和层析纯化表达蛋白。SDS-PAGE检测表明纯化纯度达到95%,蛋白相对分子量与理论值吻合。以CD20~+细胞Raji、Daudi、Ramous检测,表明该抗体能与CD20抗原特异性结合。直接测定法测得抗体亲和常数为0.113nM。体外杀伤试验说明抗体能够通过引起直接杀伤作用杀伤细胞。
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全文目录
中文摘要 3-4 英文摘要 4-5 引言 5-8 第一部分 抗体基因的克隆及表达载体的构建与鉴定 8-29 材料与方法 8-20 实验结果 20-26 讨论 26-29 第二部分 抗CD20 嵌合抗体的表达与鉴定 29-42 材料与方法 29-34 实验结果 34-39 讨论 39-42 第三部分 抗CD20 嵌合抗体生物活性的初步研究 42-55 材料与方法 42-47 实验结果 47-52 讨论 52-55 总结 55-57 参考文献 57-60 致谢 60-62 英文缩略词表 62-64 发表文章 64
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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药剂学 > 制剂学
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