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肺炎衣原体OmpA基因VD2-VD3区重组蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

作　者: 周洲
导　师: 吴移谋
学　校: 南华大学
专　业: 病原生物学
关键词: 肺炎衣原体 主要外膜蛋白 基因表达 蛋白纯化 免疫活性
分类号: R374
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 74次
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内容摘要


目的：构建含肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae，Cpn）主要外膜蛋白（MOMP）优势表位（147～297aa）基因的重组表达体，在大肠杆菌BL21中进行诱导表达，纯化表达产物并进行免疫原性和抗原性分析，为探索重组蛋白在肺炎衣原体血清学诊断中的应用奠定前期实验基础。 方法：通过生物信息学分析，筛选OmpA（MOMP的编码基因）优势抗原表位的编码基因，以Cpn AR-39标准株DNA基因组为模板，Taq聚合酶链反应扩增目的片段，将此片段克隆于pUCm-T载体，经酶切和PCR鉴定后，目的片段亚克隆于原核表达载体pET30a中，构建重组体pET30a-MOMPVD2-VD3，然后转化至表达宿主菌E．coli BL21（DE3），经酶切、PCR和测序筛选阳性克隆，挑取单个含重组质粒pET30a-MOMPVD2-VD3的工程菌阳性克隆进行培养和IPTG诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定表达产物；Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，并进行稀释透析复性，BCA法测定纯化蛋白浓度。用纯化复性的MOMPVD2-VD3重组蛋白免疫BALB／c小鼠，间接ELISA方法检测免疫鼠血清中MOMPVD2-VD3多克隆抗体的效价，对MOMPVD2-VD3重组蛋白的免疫原性进行分析；并以纯化的MOMPVD2-VD3重组蛋白包被微孔板，建立间接ELISA方法，检测Cpn参比血清和临床冠心病患者血清，同时与晶美公司Cpn IgG ELISA诊断试剂盒检测结果进行比较，根据间接ELISA检测效果，评价重组抗原在Cpn血清学诊断中的应用价值。 结果：软件分析OmpA的抗原表位编码基因并选择了OmpA的442～873bp位碱基序列为目的基因（片段长度为432bp，编码144个氨基酸），PCR扩增

全文目录


一 主要英文缩写词索引  4-6
二 中文摘要  6-8
三 英文摘要  8-10
四 正文  10-44
  1 前言  10-12
  2 实验材料  12-15
  3 实验方法及步骤  15-24
  4 实验结果  24-38
  5 讨论  38-43
  6 结论  43-44
五 参考文献  44-49
六 附录  49-56
七 文献综述  56-63
八 读硕期间业绩  63-64
九 致谢  64-65

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 衣原体属
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