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陕西省杨凌区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株选育及特性研究

作　者: 张志敏
导　师: 于三科
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 柔嫩艾美耳球虫早熟株潜隐期致病性免疫原性基因组氯化苄
分类号: S852.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 96次
引　用: 3次
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内容摘要

鸡球虫病是由复顶器门球虫寄生于鸡肠道上皮细胞内引起的一种原虫病,是以减轻体重和降低饲料转化率为主要特征的危害极其严重的全球性寄生虫病。全世界每年因球虫病造成的经济损失约为20 亿美元。目前控制鸡球虫病仍然是以药物防治为主,但由于耐药虫株的不断出现以及药物残留等问题,使药物开发和药物防治受到极大的限制。用早熟系卵囊研制成的弱毒活虫苗是目前应用范围较为广泛的球虫疫苗,在免疫预防球虫病中发挥了极其重要的作用。在鸡艾美耳属的各种球虫中,柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是致病性最强的一个种。本试验通过对陕西省杨凌区鸡E. tenella 早熟株选育并对其生物学进行研究,为球虫早熟苗的研制奠定基础;提取E. tenella 基因组DNA是从分子水平上深入研究该病的基础。本文包括以下两方面的内容。　第一部分:鸡E. tenella 早熟株选育及生物学特性研究。以陕西省杨凌区鸡E. tenella 孢子化卵囊为虫种,采用早熟系虫株选育的方法,反复收集感染后最先排出的球虫卵囊,选育出E. tenella YL 早熟株并对早熟株和母株的潜隐期、致病性、免疫原性及免疫保护力等进行了比较。结果表明:经18 代选育的E. tenella YL 早熟株的潜隐期比母株提前了24 h,卵囊的形态与母株相似,但没有母株卵囊大;用不同剂量球虫卵囊分别感染鸡时发现,早熟株的繁殖能力低于母株,每羽鸡所排卵囊量与剂量呈正相关,而每个卵囊的繁殖能力与剂量呈负相关;从试验鸡的临床症状、死亡率及盲肠病变记分等方面分析,YL 早熟株的致病性明显低于母株;在同等剂量免疫下,早熟株的免疫原性好于母株,早熟株和母株免疫组对再攻虫时的卵囊产量都有明显的抑制作用,但早熟株免疫组的抑制作用高于母株; 2 次免疫后,早熟株和母株免疫组都有较高的免疫保护力,攻虫后的卵囊抑制率均在91% 以上。　第二部分:艾美耳球虫基因组DNA 的提取。以　E. tenella 孢子化卵囊为材料,采用氯化苄法和常规提取　DNA 的方法提取了艾美耳球虫基因组　DNA。氯化苄在　65℃条件下与蛋白质和几丁质等发生反应,能够有效地破坏球虫卵囊壁,可用于大规模提取基因组　DNA;常规方法提取　DNA 的程序是用蛋白酶　K 消化处理,用酚∕氯仿抽提,再用氯仿抽提,部分步骤需要重复。通过对比试验,结果表明:这两种方法都可用于鸡球虫基因组　DNA 的提取,所获得的　DNA 数量和质量都很高,可用于各种分子生物学实验。但氯化苄法具有简便、快速、经济实用的特点,更适用于球虫卵囊大量样品　DNA 的快速提取。

全文目录

文献综述  11-33
  第一章球虫病的研究进展  11-33
    1.1 球虫病的概况  11-14
      1.1.1 艾美耳球虫的分类地位  11
      1.2.2 球虫病的流行特点  11-12
      1.2.3 球虫的生活史  12-13
      1.2.4 球虫耐药性的危害  13-14
    1.2 鸡球虫保护性免疫机制研究进展  14-19
      1.3.1 T 细胞免疫研究  15-16
      1.3.2 细胞因子研究的研究  16-17
      1.3.3 鸡球虫病体液免疫学研究  17-19
    1.3 鸡球虫疫苗研究进展  19-23
      1.3.1 强毒苗  19-20
      1.3.2 弱毒苗  20-23
      1.3.3 亚单位疫苗  23
    1.4 艾美耳球虫分子生物学研究进展  23-26
      1.4.1 艾美耳球虫染色体的研究  23-24
      1.4.2 cDNA 文库的建立  24-25
      1.4.3 应用rRNA/rDNA探针和RAPD技术研究艾美耳球虫  25-26
    1.5 球虫基因的研究进展  26-31
      1.5.1 虫体的管家基因  26-27
      1.5.2 虫体表面抗原基因  27-29
      1.5.3 阶段性虫体抗原  29-30
      1.5.4 细胞器抗原基因  30-31
    1.6 展望  31-33
实验研究  33-53
  第二章鸡E. tenella YL 株早熟株选育及生物学特性研究  33-47
    2.1 材料  34
      2.1.1 实验动物  34
      2.1.2 试验虫株  34
      2.1.3 酶和试剂  34
      2.1.4 主要仪器与设备  34
    2.2 方法  34-36
      2.2.1 E. tenella YL株母株卵囊的复苏与分离纯化  34-35
      2.2.2 E. tenella YL株早熟株选育  35
      2.2.3 E. tenella YL株卵囊潜隐期及形态的研究  35
      2.2.4 E. tenella YL株繁殖能力研究  35-36
      2.2.5 E. tenella YL株致病性研究  36
      2.2.6 E. tenella YL株免疫效果研究  36
    2.3 结果  36-44
      2.3.1 E. tenella YL株母株卵囊复苏和纯化结果  36
      2.3.2 E. tenella YL株早熟株选育结果  36-37
      2.3.3 E. tenella YL株潜隐期及卵囊形态  37-38
      2.3.4 E. tenella YL株卵囊繁殖能力  38-39
      2.3.5 E. tenella YL株致病性  39-41
      2.3.6 E. tenella YL株免疫效果试验结果  41-44
    2.4 讨论  44-46
    2.5 小结  46-47
  第三章两种方法提取鸡 E. tenella 基因组 DNA 的对比试验  47-53
    3.1 材料  48
      3.1.1 虫种  48
      3.1.2 主要试剂  48
      3.1.3 主要仪器与设备  48
    3.2 方法  48-49
      3.2.1 用氯化苄法提取球虫基因组DNA  48-49
      3.2.2 用常规法提取球虫基因组DNA  49
    3.3 结果  49
      3.3.1 电泳检测 DNA  49
      3.3.2 紫外分光光度仪检测  49
    3.4 讨论  49-52
    3.5 小结  52-53
结论  53-54
参考文献  54-64
致谢  64-65
作者简介  65

陕西省杨凌区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株选育及特性研究

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