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雌激素、吉非贝齐对载脂蛋白AⅠ基因转录调控作用的研究

作　者: 陈孟英
导　师: 赵炳让
学　校: 天津医科大学
专　业: 心血管内科
关键词: 载脂蛋白A I 雌激素吉非贝齐基因转录调控
分类号: R541.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 25次
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内容摘要

目的:观察雌激素和吉非贝齐对载脂蛋白AⅠ(Apolipoprotein A Ⅰ,ApoA Ⅰ)基因转录活性和表达的影响,探讨ApoA Ⅰ基因启动子区域调控元件在基因转录调控中的作用和潜在机制。方法:在体外培养的HepG2细胞中,分别加入1,10,20,30μ mol/L的雌激素或20,40,50,60μg/ml的吉非贝齐共同孵育24小时,收集细胞提取RNA及核蛋白;在HepG2细胞中加入10μ mol/L雌激素或40μ g/ml吉非贝齐培养1,6,24小时分别提取RNA及核蛋白。RNA采用逆转录-聚合酶链反应方法测定不同剂量及不同时间点的ApoA Ⅰ mRNA表达。以ApoA Ⅰ基因启动子肝特异性增强子的A位点序列为探针,用凝胶电泳迁移率滞后实验(EMSA),测定加入雌激素刺激的HepG2细胞核蛋白提取物与A位点的结合情况:以ApoA Ⅰ基因启动子-77～-45bp(drug reaction element,DRE)序列为探针,用EMSA实验测定加入吉非贝齐刺激的HepG2细胞核蛋白提取物与DRE位点的结合情况结果:(1)用不同剂量的雌激素刺激HepG2细胞,ApoA Ⅰ的mRNA表达呈剂量依赖性增加,加入10,20,30μ mol/L雌激素刺激后,ApoA Ⅰ的mRNA表达明显高于1 μ mol/L时,并且随剂量的增加而增高。用10 μ mol/L雌激素刺激HepG2细胞1小时后,ApoA Ⅰ mRNA表达水平未见增加,6小时后ApoA Ⅰ mRNA表达水平开始增加,以24小时后的表达水平最高。(2)EMSA实验结果显示,以ApoA Ⅰ启动子区域肝特异性增强子的A位点作为探针,可与某种核蛋白特异性结合。当雌激素浓度为1 μ mol/L时,A探针结合的蛋白量变化不明显,当雌激素浓度增加到10,20,30μ mol/L时,A探针结合的蛋白量也逐渐增多。此外,A探针结合的核蛋白量随时间的延长而增加。竞争抑制实验显示,加入50倍未标记的A探针后可部分抑制标记A探针与核蛋白的结合,加入100和200倍未标记A探针后可完全抑制标记A探针与核蛋白

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-8
前言  8-11
材料与方法  11-27
结果  27-33
讨论  33-45
小结  45-46
参考文献  46-51
综述  51-67
致谢  67

雌激素、吉非贝齐对载脂蛋白AⅠ基因转录调控作用的研究

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