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海洋细菌Bacillus Pumilus PLM4抗肿瘤胞外多糖的研究

作　者: 王松柏
导　师: 梁静娟
学　校: 广西大学
专　业: 微生物学
关键词: 海洋细菌 抗肿瘤 胞外多糖 分离纯化 性质 结构 活性
分类号: R73-36
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


本实验室筛选到的一株海洋短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus PLM4）能产生具有抗肿瘤活性的胞外多糖。本研究主要对该胞外多糖进行了分离纯化、部分性质、基本结构与抗肿瘤活性的初步研究,结果如下: 海洋短小芽孢杆菌发酵液通过离心去除其中的菌体,然后上清液再经浓缩、透析、浓缩、乙醇沉淀分离得到胞外多糖粗品。该胞外多糖粗品经Sephadex G-100凝胶柱层析能够有效地得到纯化,这已经聚丙烯酰胺凝胶电泳以及高效凝胶渗透色谱法所证实。 纯化后的胞外多糖经气相色谱-质谱分析可知含有甘露糖与葡萄糖两种糖基组分,其摩尔比为3.37:1;经化学分析得知该多糖中还含有较多的己糖醛酸（56.96%）与少量的丙酮酸（0.83%）,不含有乙酰基与硫酸基。该胞外多糖经凝胶渗透色谱法测定其分子量为116,000。 经红外光谱分析、高碘酸氧化以及Smith降解可知该胞外多糖的基本结构是以1→3连接为主体,但有较多1→6连接分枝,以及少量的1→2连接和很少量的1→4连接,可见该胞外多糖为具有复杂分枝结构的酸性杂多糖,其糖基为β-D-甘露吡喃糖与β-D-葡萄吡喃糖构型。 抗肿瘤活性的初步研究表明纯化胞外多糖的体外抗人喉癌Hep-2细胞活性显著,Gl50为<15.6ug/ml,该胞外多糖粗品（剂量:150mg/kg×10）的小鼠体内抗Sarcoma-180、H22实体瘤活性明显,抑瘤率分别为28.70%和37.72%。

全文目录


第一章 前言  9-17
  1.1 研究背景  9-16
    1.1.1 肿瘤严重威胁着人类健康和生命安全  9
    1.1.2 多糖的抗肿瘤研究概况  9-10
    1.1.3 多糖的抗肿瘤作用机理  10-15
    1.1.4 海洋抗肿瘤药物的开发具有重要意义  15-16
  1.2 研究目的与内容  16-17
    1.2.1 研究目的  16
    1.2.2 研究内容  16-17
第二章 BACILLUS PUMILUS PLM4抗肿瘤胞外多糖的分离纯化研究  17-35
  2.1 材料与方法  17-34
    2.1.1 材料  17-19
    2.1.2 菌株与发酵条件  19
    2.1.3 抗肿瘤活性的检测  19-22
    2.1.4 糖含量的测定  22-23
    2.1.5 BACILLUS PUMlLUS PLM4胞外多糖粗品的分离制备  23-24
    2.1.6 BACILLUS PUMILUS PLM4胞外多糖的纯化  24-31
    2.1.7 纯化后胞外多糖的纯度鉴定及分子量的测定  31-34
  2.2 小结与讨论  34-35
第三章 BACILLUS PUMILUS PLM4抗肿瘤胞外多糖的组成性质研究  35-43
  3.1 材料与方法  35-42
    3.1.1 主要仪器：  35
    3.1.2 主要药品：  35-36
    3.1.3 纯化多糖样品的茚三酮反应  36
    3.1.4 纯化多糖样品中硫酸基的检测  36-37
    3.1.5 纯化多糖样品中丙酮酸含量的测定  37-39
    3.1.6 测定纯化多糖样品中己糖醛酸的含量  39-40
    3.1.7 纯化多糖样品中乙酰基的检测  40
    3.1.8 纯化多糖样品中性糖组分的气相质谱-质谱联用分析  40-42
  3.2 小结与讨论  42-43
第四章 BACILLUS PUMILUS PLM4抗肿瘤胞外多糖结构的初步研究  43-59
  4.1 BACILLUS PUMlLUS PLM4胞外多糖结构的初步研究  43-58
    4.1.1 多糖的结构  43
    4.1.2 多糖结构的分析方法  43-47
    4.1.3 多糖的结构与抗肿瘤活性的关系  47-51
    4.1.4 研究内容与方法  51-58
  4.2 小结与讨论  58-59
第五章 BACILLUS PUMILUS PLM4胞外多糖抗肿瘤活性初步研究  59-62
  5.1 BACILLUS PUMILUS PLM4胞外多糖体外活性的初步研究  59
  5.2 BACILLUS PUMILUS PLM4胞外多糖粗品体内活性的初步研究  59-61
  5.3 小结与讨论  61-62
    5.3.1 小结  61
    5.3.2 讨论  61-62
第六章 总结与展望  62-64
  6.1 总结  62-63
  6.2 展望  63-64
参考文献  64-68
致谢  68-69
攻读硕士学位期间发表论文情况  69

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究 > 治疗实验
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