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血竭素高氯酸盐能抑制高糖活化的人肾小球系膜细胞中TGF-β1/SGK1/FN信号通路

作　者: 谢议凤
导　师: 刘建国
学　校: 华中科技大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 血竭素高氯酸盐转化生长因子-β1 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1 纤连蛋白信号通路糖尿病肾病肾纤维化
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的观察血竭素高氯酸盐(Dracorhodin Perchlorate,DP)对高糖环境下培养的人肾小球系膜细胞(Human mesangial cells,HMC)中转化生长因子-β1 (transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)/血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(serum and glucocorticoid inducible kinase 1,SGK1)/纤维连接蛋白(fibronectin ,FN )信号通路的抑制作用,探讨其防治糖尿病肾病肾脏纤维化的作用与机制。方法将体外培养的HMC分为正常糖组(NG组,5.5 mmol·L-1D-葡萄糖)、正常糖+DP低剂量组(NG+LDP组,5.5 mmol·L-1 D-葡萄糖+7.5μmol·L-1DP)、正常糖+DP高剂量组(NG+HDP组,5.5 mmol·L-1 D-葡萄糖+15μmol·L-1DP)、高糖组(HG组,25 mmol·L-1 D-葡萄糖)、高糖+DP低剂量组(HG+LDP组,25 mmol·L-1 D-葡萄糖+7.5μmol·L-1DP)、高糖+DP高剂量组(HG+HDP组,25 mmol·L-1 D-葡萄糖+15μmol·L-1DP),作用24 h后,采用RT- PCR和Real-time PCR法检测各组细胞中TGF-β1、SGK1、FN mRNA的水平,并采用间接免疫荧光和western blot方法检测细胞中TGF-β1、SGK1、FN蛋白的表达。结果在正常糖组HMC中有基础量的TGF-β1、SGK1、FNmRNA及蛋白的表达,经7.5μmol·L-1的DP作用24 h后,TGF-β1、SGK1、FNmRNA水平及蛋白与NG组相比无明显差异(P>0.05),但经15μmol·L-1L的DP作用24 h后,TGF-β1、SGK1、FNmRNA及蛋白水平较NG组明显下降(P<0.05或P<0.01);与NG组相比较,HG组中HMC中的TGF-β1、SGK1、FNmRNA及蛋白水平显著性增加(P<0. 01);与HG组相比较,HG+LDP组和HG+HDP组中,HMC的TGF-β1、SGK1、FNmRNA及蛋白水平显著性下降(P<0.05或P<0.01)。结论血竭素高氯酸盐能抑制高糖活化的人肾小球系膜细胞中TGF-β1/SGK1/FN信号通路,这可能是其防治DN肾纤维化作用的部分机制。

全文目录

英文缩略词  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
第一章前言  10-13
第二章实验材料和仪器  13-18
  2.1 实验材料  13-15
  2.2 实验仪器设备  15-18
第三章实验方法  18-27
  3.1 细胞培养与实验分组  18
  3.2 实验方法  18-26
  3.3 统计分析  26-27
第四章实验结果  27-37
  4.1 RT-PCR 检测各组HMC 中TGF-β1，SGK1 和 FN mRNA 表达量  27-29
  4.2 Real-time PCR 检测各组HMC 中SGK1 和 FN mRNA 表达量  29-30
  4.3 间接免疫荧光检测各组HMC 中TGF-β1，SGK1 和 FN 蛋白表达量  30-35
  4.4 Western blot 检测各组HMC 中TGF-β1 和SGK1 蛋白表达量  35-37
第五章讨论与总结  37-43
参考文献  43-50
综述  50-60
  参考文献  54-60
附录  60-62
致谢  62

血竭素高氯酸盐能抑制高糖活化的人肾小球系膜细胞中TGF-β1/SGK1/FN信号通路

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