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人参皂苷Rb1预防大鼠肝窦阻塞综合征的作用及其信号转导机制的实验性研究

作　者: 李珍
导　师: 夏凌辉
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 野百合碱人参皂苷Rb1 肝窦阻塞综合征肝窦内皮细胞 PI3K/AKT 人参皂苷R b1 内皮型一氧化氮合酶一氧化氮
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

第一部分人参皂苷Rb1对大鼠肝窦阻塞综合征的影响目的:建立野百合碱(Mct)诱导大鼠肝窦阻塞综合征(SOS)的动物模型,探索人参皂苷Rb1(Rb1)对Mct所致大鼠SOS的预防作用。方法:采用野百合碱(Mct)灌胃方法制备大鼠早期SOS模型。人参皂苷Rb1分别以15mg/kg和30mg/kg两种剂量通过尾静脉注射(iv)或腹腔注射(ip)预防性给药,分析实验结果,评价人参皂苷Rb1对SOS的预防效果。本实验将40只SD大鼠随机分为8组,每组5只,分别为:正常对照组A; Mct模型组B;Rb1 15mg/kg iv预防组C;Rb1 15mg/kg ip预防组D;Rb1 30mg/kg iv预防组E;Rb1 30mg/kg ip预防组F;Rb1 30mg/kg iv单用组G;Rb1 30mg/kg ip单用组H。实验第1天,C、D、E、F、G、H组大鼠按相应剂量给予人参皂苷Rb1,持续给药6天。在实验第3天,B、C、D、E、F组大鼠分别给予Mct 160mg/kg灌胃一次。实验第7天处死大鼠,吸取腹水,取肝脏称重,检测血清TBil、ALT、AST三项指标,肝脏组织病理切片HE染色并记录实验数据,处理方法采用多组间均数比较用方差分析,等级资料采取卡方检验,P<0.05为差异有意义。结果:1.与正常对照组比较,Mct模型组大鼠肝脏系数显著增加(P <0.01),由正常的3.71上升至5.57;生成腹水量均数达8.2ml;血清TBil、ALT、AST上升显著(正常组均数TBil:0.72 umol/l,ALT:32.2U/L, AST:136.6U/L;Mct模型组:TBil:22.38umol/l,ALT:1015.4U/L ,AST:653.4U/L ;P值均<0.05)。Mct模型组5例大鼠肝脏病理切片均为重度肝窦阻塞综合征的表现:肝细胞损害严重,坏死广泛且严重,呈花斑状,小叶结构被破坏,中央静脉区坏死严重,中央静脉不易见,肝窦出血,汇管区及坏死区炎细胞浸润。2. Rb1预防组与模型组、正常对照组的比较如下:(1)四个Rb1预防组肝脏系数较Mct模型组降低约24%-34%,与正常组比较无明显差异(P >0.05)。(2)生成腹水量均数为0.28~1.4ml,比Mct模型组(8.2ml)明显降低,与正常组无明显差异(P >0.05)。(3)与Mct模型组相比,15mg/kg ip预防组血清TBil降低(P <0.05),其余三个预防组降低不明显(P >0.05)。(4)四个预防组ALT较Mct模型组均明显降低(P <0.01),与正常组无明显差异(P >0.05)。(5)15mg/kg iv预防组AST水平与模型组相比下降(P <0.05),四个预防组AST与正常组相比无明显差异(P >0.05)。(6)四个预防组肝脏病理切片结果经卡方检验,15mg/kg iv预防组C和15mg/kg ip预防组D病理变化较模型组减轻(P <0.05),与正常对照组相比仍有差距(P <0.01);30mg/kg iv预防组E和30mg/kg ip预防组F与模型组未见差异,与正常对照组差异明显(P <0.01)。3.采用主成分分析对SOS程度进行综合评分,综合得分越大,SOS病变程度越重。结果显示15mg/kg ip预防组D得分最少,SOS病变程度最轻,其次为15mg/kg iv预防组C、30mg/kg ip预防组F、30mg/kg iv预防组E。结论:1.模型组大鼠肝脏系数、腹水量、肝功能指标较正常组上升(P <0.01),提示肝脏受损,病理切片也符合重度SOS病理表现,证明SOS疾病模型构建成功。2.人参皂苷Rb1预防组大鼠平均肝脏系数、腹水、肝功能和病理表现较Mct模型组明显减轻,提示预先使用人参皂苷Rb1可以明显地减轻早期SOS。3.低剂量Rb1(15mg/kg)预防组与高剂量Rb1(30mg/kg)预防组相比,前者SOS病变减轻更为明显,提示低剂量Rb1可能在大鼠SOS模型中发挥更好的预防作用。4. Rb1腹腔注射预防组和Rb1尾静脉注射组之间平均肝脏系数、腹水、肝功能和病理表现均无明显差异,但腹腔注射给药方法操作简单,是相对理想的给药方式。第二部分人参皂苷Rb1对大鼠肝窦阻塞综合征信号转导途径的影响目的研究人参皂苷Rb1对内皮细胞保护剂内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)的表达及一氧化氮(NO)合成的调控,并探索其对3-磷脂酰肌醇激酶(PI3K)信号转导通路的影响,为Rb1预防SOS作用提供理论及实验依据。方法:在第一部分实验分组设计基础上,取第一部分实验标本进一步检测,硝酸还原酶法检测血清NO含量;实时荧光定量PCR检测肝脏eNOSmRNA的相对含量;Western Blot法检测各组蛋白激酶B/磷酸化丝氨酸激酶(AKT/P-AKT)的表达。结果:1.与正常组比较,Mct模型组NO均数下降了52%,(正常组28.89μmol/L,Mct模型组14μmol/L, P <0.01);eNOSmRNA表达量下降了40%(P <0.05)。2.四个人参皂苷Rb1预防组血清NO均较Mct模型组上升(P <0.05),上升约8~12μmol/L;15mg/kg ip预防组可维持到与正常组无差异(P >0.05),但其余三个预防组与正常组相比仍存在差异(P <0.05) 3.四个人参皂苷Rb1预防组eNOSmRNA水平均较Mct模型组增高39%~66% (仅30mg/kg ip预防组F P >0.05,其余3组P <0.05),各预防组eNOSmRNA表达水平与正常组无差异(P >0.05)。4.与正常组相比, Mct模型组肝脏表达P-AKT/AKT比值下降(P <0.05)。5.与模型组相比,四个人参皂苷Rb1预防组P-AKT/AKT比值均有增高(P <0.05),与正常组相比,未见明显差异(P >0.05)。结论:1.大鼠SOS模型中血清NO合成降低、eNOSmRNA表达下调,证实了肝窦阻塞综合征的早期即存在肝窦内皮细胞的损伤。2.人参皂苷Rb1可以增强大鼠肝脏eNOS酶的表达、促进NO合成,发挥内皮细胞保护作用。3.大鼠SOS模型中PI3K/AKT信号途径受抑,人参皂苷Rb1可以减轻Mct对PI3K/ AKT信号途径的抑制,PI3K/AKT信号途径活化与NO合成密切相关,人参皂苷Rb1可能通过激活PI3K/ AKT信号通路促进NO合成,保护肝窦内皮细胞,发挥预防SOS作用。因此为Rb1预防SOS提供了初步的理论和实验依据。

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中英文对照  5-7
中文摘要  7-11
Abstract  11-16
前言  16-22
  参考文献  19-22
第一部分人参皂苷R61对大鼠肝窦阻塞综合征的影响材料和方法  22-37
  材料与方法  22-25
  结果  25-31
  讨论  31-34
  参考文献  34-37
第二部分人参皂苷Rb1对大鼠肝窦阻塞综合征信号转导途径的影响  37-55
  材料和方法  37-47
  结果  47-50
  讨论  50-52
  参考文献  52-55
综述  55-63
  参考文献  60-63
小结与展望  63-64
附录  64-65
致谢  65

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