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斑蝥素对人白血病HL-60细胞株hTERT mRNA表达的影响及启动子甲基化作用初探

作　者: 崔思远
导　师: 徐瑞荣
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 斑蝥素白血病 HL60 端粒酶逆转录酶甲基化
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：研究斑蝥素对人白血病 HL60细胞株端粒酶逆转录酶mRNA表达的影响及启动子甲基化的作用,以期阐明斑蝥素抗白血病的机制是否与其通过调控hTERT启动子甲基化水平来调节hTERT表达有关。方法：采用MTT法证实斑蝥素抑制HL60细胞株增殖的确切作用；倒置显微镜观察药物作用后的肿瘤细胞形态并摄片；采用RT-PCR半定量法检测不同浓度斑蝥素对HL60细胞株端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA的表达情况的影响；利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)的方法,用亚硫酸氢钠修饰后的DNA为模板进行聚合酶链反应(PCR),检测不同浓度斑蝥素对HL60细胞株hTERT启动子甲基化作用情况。结果：斑蝥素可抑制HL60细胞增殖,具有明显的时间和剂量效应；空白组与中剂量斑蝥素组之间、空白组与高剂量斑蝥素组之间以及中高剂量斑蝥素组之间hTERTmRNA的相对表达量比较均具有显著差异性(P<0.01)；中剂量斑蝥素组、高剂量斑蝥素组均能降低hTERTmRNA的相对表达量(P<0.01)；高剂量组hTERTmRNA的相对表达量低于中剂量组(P<0.01)；各组hTERT启动子均处于甲基化状态。结论：斑蝥素抑制HL60细胞株增殖的作用与其下调hTERTmRNA的表达有关；斑蝥素对hTERT启动子甲基化的影响有待于采用实时定量MSP法做进一步研究。

全文目录

提要  3-4
Abstract  4-7
引言  7-9
实验材料  9-12
  一、主要仪器  9
  二、主要试剂及材料  9-11
  三、主要溶液的配制方法  11-12
实验过程  12-19
  一、细胞培养、冻存、复苏  12
  二、MTT法检测斑蝥素抑制HL60细胞株增殖作用  12-13
  三、RT-PCR法检测hTERTmRNA表达  13-15
  四、MSP法检测hTERT启动子甲基化  15-19
统计方法  19
实验结果  19-24
  一、加药培养24h、48h后细胞形态  19-21
  二、MTT法检测斑蝥素抑制HL60细胞株增殖作用  21
  三、RT-PCR半定量检测hTERTmRNA表达情况  21-23
  四、MSP法检测hTERT启动子甲基化  23-24
讨论  24-33
  一、端粒酶及甲基化在白血病中的重要作用  24-27
    (一) 端粒  24
    (二) 端粒酶  24-25
    (三) hTERT基因的结构特点和意义  25
    (四) DNA甲基化与白血病  25-26
    (五) hTERT的甲基化调节  26-27
    (六) 端粒酶在白血病细胞中的表达  27
  二、中医学对白血病的认识  27-29
    (一) 历代医家对白血病的认识  27
    (二) 病因病机  27
    (三) 治则治法  27-28
    (四) 现代中医药对白血病的研究  28-29
  三、斑蝥素对白血病等恶性肿瘤的干预作用  29-30
    (一) 斑蝥素诱导肿瘤细胞凋亡  30
    (二) 抗肿瘤细胞的侵袭和转移  30
    (三) 逆转多药耐药  30
    (四) 直接作用于肿瘤干、祖细胞  30
  四、实验结果及分析  30-33
结语  33-34
参考文献  34-38
综述  38-51
  参考文献  46-51
致谢  51-52
详细摘要  52-57

斑蝥素对人白血病HL-60细胞株hTERT mRNA表达的影响及启动子甲基化作用初探

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