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大鼠慢性移植物肾病模型中GSK3β的表达及其病理意义

作　者: 俞欣
导　师: 顾民
学　校: 南京医科大学
专　业: 外科学
关键词: 肾移植慢性移植物肾病 GSK3β NF-κB
分类号: R692
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
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内容摘要

目的:建立大鼠慢性移植物肾病模型,观察糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase,GSK3β)及核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在大鼠慢性移植物肾病(chronic allograft nephropathy,CAN)模型移植肾中的表达。初步探讨GSK3β在慢性移植物肾病中的作用机制。方法: 1.建立大鼠CAN模型:F344和Lewis近交系大鼠作为供、受体,取供体的左肾作为供肾,双人双目显微镜下摘除受体左肾,供肾肾静脉与受体肾静脉行端端吻合,供肾肾动脉与受体肾动脉行端端吻合,供肾膀胱瓣与受体膀胱吻合,行原位异体肾移植。术后10d,切除受体右肾。术后予注射用环孢素A(CsA)1.5mg/(kg·d),皮下注射给药,给药10d,建立大鼠CAN模型。2.本实验设立CAN组(n=10)、同系移植组(n=10),对照组(n=10)。CAN组以雄性F344大鼠为供体,雄性Lewis大鼠为受体;同系移植组以雄性Lewis大鼠为供、受体。对照组以雄性Lewis大鼠行单肾切除。CAN组及同系移植组大鼠移植术后按1.5mg/(kg·d)皮下注射环孢素A,共10d,于术后第10d切除大鼠右肾。3.移植术后检测指标:术后12周处死各组动物,检测24 h尿蛋白定量、血清肌酐、血清尿素氮。取移植肾标本观察组织形态学变化,并用SP免疫组织化学方法对移植肾组织GSK3β、NF-κB p65的表达进行观察,Western blot方法对移植肾组织中GSK3β进行半定量分析。结果1 .大鼠CAN模型的建立:通过手术训练技术成熟后共进行40例手术,手术成功率85%,手术失败原因主要为吻合口出血及血栓形成。供体、受体手术时间分别为63±17、59±7 min,热缺血时间1 min左右,冷缺血时间为48±10 min。2. CAN模型组24 h尿蛋白定量和血肌酐、血尿素氮水平较同种同系移植组及对照组明显升高,有统计学差异(P<O.O5)。同系移植组移植肾及对照组肾脏肾小管细胞排列整齐,细胞染色均匀,肾小球结构基本正常。CAN组移植肾表现为炎性细胞侵润,肾小球基底膜增厚,肾小管基底膜增厚,间质纤维化和蛋白管型。3同系移植组及对照组肾组织中,GSK3β肾小管上皮细胞呈低度着色;CAN组移植肾组织中,GSK3β在肾小管上皮细胞胞浆或细胞核中呈弥漫性、强阳性表达;CAN组GSK3β表达阳性率明显高于同系肾移植组和对照组(P<0.01)。同系移植组及对照组肾组织中,NF-κBp65肾小管上皮细胞呈低度着色;CAN组移植肾组织中,NF-κBp65在肾小管上皮细胞胞浆或细胞核呈弥漫性表达;CAN组NF-κBp65表达阳性率明显高于同系肾移植组和对照组(P<0.01)。Western blot半定量分析发现,CAN组GSK3β表达量较同系移植组和对照组明显增加(P<0.05)。结论1.以F344大鼠和Lewis大鼠分别作为供、受体,显微镜下行原位异体肾移植,该方法手术操作简单、缝合确切,建立大鼠原位异体肾移植模型,并达到CAN模型的要求。2. GSK3β、NF-κB在大鼠慢性移植物肾病中发挥重要作用。3. GSK3β可能通过调控NF-κB介导的炎症反应在CAN的发生发展中发挥作用。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
前言  8-10
1 材料和方法  10-18
2 结果  18-26
3 讨论  26-29
4 结论  29-30
参考文献  30-33
文献综述  33-44
  参考文献  39-44
附录  44-45
发表文章情况  45-46
致谢  46

大鼠慢性移植物肾病模型中GSK3β的表达及其病理意义

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