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吉西他滨与顺铂对人肺癌A549细胞的作用研究

作　者: 唐域
导　师: 邱雪杉
学　校: 中国医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 非小细胞肺癌吉西他滨顺铂药物时序
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

前言肺癌是对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一,在众多的治疗方法中,化疗是治疗非小细胞肺癌NSCLC最主要的手段,而吉西他滨(Gemcitabine,GEM)是其中最有效的化疗药之一。顺铂(Cisplatin, CDDP)属细胞周期非特异性抗肿瘤药,是应用最广泛的抗癌药物之一。其特点是抗癌作用强,抗癌活性高,与其他抗癌药物无交叉耐药性,因而常与其他药物配合使用。许多体内和体外实验均证实吉西他滨与顺铂两药联用化疗药效明显高于单药,二者之间存在协同和相加作用。随着药物的联用,由于药物浓度的变化而引起的不良反应和副作用也随之而来,如何在不增加药物剂量的前提下通过调整用药顺序达到最佳效果迅速成为学者们研究的焦点,不同时序下给药的剂量,用药时间及两药相互作用的具体机制尚都需要深入的研究,目前,吉西他滨与顺铂联用的GP方案在肺腺癌中的临床应用显示了良好的前景,优化最佳时序组合方式为临床提供选择尤显重要。本研究使用人肺腺癌细胞系A549做为研究对象,探讨了在不同的给药时序下的细胞学作用机制,为临床更好的治疗NSCLC提供了实验室依据。材料与方法1、药品：注射用盐酸吉西他滨(泽菲)、顺铂注射液均由江苏豪森药业公司提供。2、细胞培养：人肺腺癌A549细胞系用含有10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃,5%CO2的培养箱内培养。3、四甲基偶氮唑盐(tetrazolium, MTT)法检测细胞增殖能力取对数生长期的细胞悬液进行细胞计数,稀释至密度5×104个/ml,分别接种于4个96孔板培养板,每孔加入100ul细胞悬液,即每孔接种5000个细胞。接种24小时后加入各种处理因素。处理后第24、48、72、96小时分别加入MTT(5mg/ml)20μl,继续孵育4小时后,每孔加入150μl DMSO溶解结晶,选择波长490nm在酶联免疫(ELISA)检测仪上测定各孔吸光度。实验重复3次。绘制细胞生长曲线。4、流式细胞仪检测细胞周期收集不同处理因素的对数生长期细胞制成1×107个／ml细胞悬液。PBS洗涤,取lml细胞悬液75%冷乙醇于4℃固定过夜、离心后弃上清制成500 u 1的细胞悬液,加碘化丙啶染液(PI)于4℃避光孵育45分钟后用FACS Calibur流式细胞仪检测,ModFitLT3.0软件分析细胞周期。5、流式细胞仪检测细胞凋亡收集不同处理因素的对数生长期细胞制成1×107个／ml细胞悬液。PBS洗涤,加入ANNEXIN V-FITC和PI染料,避光处理,使用FACS Calibur流式细胞仪检测凋亡情况,计算细胞凋亡百分率。6、统计分析：使用SPSS17.0统计软件进行数据处理,以均数±标准差(X±SD)表示的数据,其实验至少重复3次,以P<0.05为有统计学意义。结果1、吉西他滨或顺铂单药对A549细胞的抑制作用根据两种药物血浆峰浓度选择不同浓度梯度单药作用于A549,取24小时、48小时、72小时为时间点检测,所得结果用于计算单药的半数抑制浓度IC50。吉西他滨作用24小时、48小时、72小时的IC50分别为3.79±0.32 mg/L、1.11±0.12mg/L.0.23±0.06mg/L,72小时的IC50约为24小时的16倍；顺铂作用24小时、48小时、72小时的IC50分别为18.58±2.01mg/L.3.78±0.25 mg/L.0.76±0.10 mg/L,且随浓度增大抑制作用增大呈量效关系。2、吉西他滨和顺铂不同时序给药对A549细胞的抑制作用根据所测得的单药作用于A549细胞的半数抑制浓度IC50,我们选择固定给药时间来检测不同时序给药方案对A549细胞的抑制作用。所得结果计算联合用药下抑制率达50%时两药的浓度,通过公式求得药物联合指数CI。先吉西他滨1天后顺铂1天CI<1,二者为协同作用；先顺铂1天后吉西他滨1天,CI>1两药为拮抗作用；吉西他滨和顺铂同时应用,CI约等于1,两药为叠加作用。3、吉西他滨和顺铂联合不同时序给药对A549细胞凋亡的影响为探讨两药联合作用的机理,吉西他滨和顺铂的用量为各自IC50的1：1对照组凋亡率为2.82%±0.12%；单GEM组凋亡率为14.54%±2.36%；单CDDP组凋亡率为15.06%±1.31%；先GEM后CDDP组凋亡率为25.72%±3.29%；先CDDP后GEM组凋亡率为10.99%±1.04%；GEM与CDDP同时作用组凋亡率为19.24%±3.61%。先用GEM后用CDDP处理时A549细胞的凋亡率高于其他处理组(P<0.01),有统计学意义。4、吉西他滨和顺铂联合不同时序给药对A549细胞周期的影响单药作用时吉西他滨和顺铂都能使S期的细胞比例增多(G VS Control,C VS Control, P<0.05),先GEM后CDDP作用下G1期和G2期的细胞比例增加(GC VS Control, P<0.05),先CDDP后GEM作用时主要S期细胞比例增加(CG VS Control, P<0.05), GEM+CDDP共同作用时也测到S期细胞比例增加(G+C VS Control, P<0.05)结论吉西他滨和顺铂联合使用对肺腺癌A549细胞的抑制作用存在方案依赖性,先吉西他滨后顺铂能得到最佳的抑制效果,本研究为临床上两药联合作用的时序选择提供了理论参考。

全文目录

一、摘要  4-11
  中文论著摘要  4-7
  英文论著摘要  7-11
二、英文缩略语  11-12
三、论文  12-23
  前言  12-13
  材料与方法  13-15
  结果  15-21
  讨论  21-22
  结论  22-23
四、本研究创新性的自我评价  23-24
五、参考文献  24-26
六、附录  26-37
  综述  26-35
    参考文献  31-35
  在学期间科研成绩  35-36
  致谢  36-37
  个人简介  37

吉西他滨与顺铂对人肺癌A549细胞的作用研究

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