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B7-1基因转染抑制胃癌生长和转移的实验研究

作　者: 亢健
导　师: 夏建国
学　校: 南京医科大学
专　业: 外科学
关键词: B7-1 SGC-7901 淋巴结转移免疫基因治疗
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:构建B7-1基因真核表达质粒,稳定转染胃癌细胞株SGC-7901,研究B7-1基因对人胃癌生物学特性的影响。方法:分离外周血单个核细胞(PBMC),提取总RNA,采用RT-PCR方法获得B7-1基因,酶切引入酶切位点的B7-1基因和质粒pcDNA3.1(+),纯化回收连接转化大肠杆菌,挑取阳性克隆扩增后提取质粒,双酶切鉴定并行核酸序列测定,命名重组质粒为B7-1pcDNA3.1(+)。将重组质粒和空载体质粒分别转染SGC-7901细胞,用G418筛选分别建立稳定转染细胞株S-B和S-P。RT-PCR和FCM分别从mRNA和蛋白水平检测B7-1基因表达,检测细胞周期分布。分离人外周血单个核细胞(PBMC),分别与S-B、S-P、S共培养,检测PBMC粘附力和杀伤力,检测胃癌细胞凋亡情况。将S-B、S分别接种于BALB/c裸鼠胃大弯侧,观察B7-1基因转染对胃癌生长及淋巴转移的影响。结果:成功构建B7-1基因真核表达质粒B7-1pcDNA3.1(+),建立稳定转染细胞株S-B、S-P。S-B中B7-1基因高表达,S-P和S中B7-1基因不表达。S-B与S-P、S在细胞周期上存在显著差异。S-B与PBMC的粘附力和杀伤力均明显高于S-P和S,而S-P与S无显著差异。种植S-B的小鼠成瘤率和淋巴结转移率均低于S,免疫组化染色见NK细胞广泛浸润于S-B种植形成的肿瘤组织。结论: B7-1基因转染使SGC-7901细胞周期进程减缓,停滞于S期;B7-1基因转染明显提高了PBMC对SGC-7901细胞的粘附力和杀伤力;B7-1基因转染抑制了SGC-7901细胞在BALB/c小鼠体内的生长和淋巴结转移。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
前言  7-8
材料与方法  8-17
结果  17-31
分析与讨论  31-36
结论  36-37
参考文献  37-43
综述  43-55
  参考文献  50-55
附录  55-63
攻读学位期间发表文章情况  63-64
致谢  64

B7-1基因转染抑制胃癌生长和转移的实验研究

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