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口腔癌中癌相关成纤维细胞体外生物学行为研究

作　者: 李强
导　师: 邢树忠
学　校: 南京医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 口腔癌癌相关成纤维细胞成纤维细胞激活蛋白侵袭 Transwell小室
分类号: R739.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的探讨人口腔牙龈鳞癌中癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts, CAFs)的体外增殖、黏附、侵袭、迁移能力,并研究其特殊相关蛋白表达,以口腔牙龈正常成纤维细胞(normal fibrolasts, NFs)作为对照;同时研究其体外异常侵袭、迁移能力与其细胞中成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein, FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及基质金属蛋白酶-2 (matrix metalloprotease-2, MMP-2)表达水平的关系。方法应用组织块贴壁法原代培养同一病人口腔牙龈CAFs及NFs;取三代以后纯化细胞进行形态观察,免疫组化染色、细胞增殖活性、贴壁率、划痕实验及transwell侵袭测试等,比较两种细胞的体外生物学行为差异;应用Matrigel凝胶包被过的transwell小室初步筛选非侵袭性细胞株CAFs-NI (carcinoma associated fibroblasts-non-invasive)及侵袭性细胞株CAFs-HI (carcinoma associated fibroblasts hyper -invasive),行免疫组化染色、Western Bloting免疫印记检测、流式细胞免疫荧光计数,分析其FAP、α-SMA、MMP-2三种蛋白表达水平差异。结果1纯化后的CAFs及NFs镜下呈现不同细胞形态及生长特性;两种细胞均表现为典型的‘S’形生长曲线,但是CAFs的体外增殖活性明显高于NFs;两种细胞各时间点贴壁率比较CAFs亦高于NFs;划痕实验表明,CAFs细胞运动能力更强,24h后可基本修复0.8mm的划痕,NFs迁移能力相对较低,CAFs的transwell侵袭能力也明显高于高于NFs (P<0.05)。2免疫组化染色鉴定发现,两种细胞均表现为波形蛋白(Vimentin)阳性表达及角蛋白(Cytokeratin)阴性表达,但是CAFs可有FAP、α-SMA及MMP-2的特异表达,而NFs则为阴性。3免疫组化染色、Western Bloting免疫印记检测、流式细胞免疫荧光计数结果显示FAP、α-SMA及MMP-2三种蛋白在高侵袭性细胞株CAFs-HI中的表达水平均比CAFs-NI高(P<0.05)。结论1口腔牙龈CAFs体外增殖、粘附、迁移、侵袭能力均高于NFs;2口腔牙龈CAFs可特征性表达FAP、α-SMA及MMP-2等相关蛋白;3口腔牙龈CAFs体外高侵袭能力与其FAP、MMP-2、α-SMA蛋白表达水平正相关,这三种蛋白可能介导CAFs某些特殊的生物学行为。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-10
第1部分 CAFs 体外分离培养和初步鉴定  10-18
第2部分 CAFs 与NFs 体外迁移、侵袭能力比较  18-26
第3部分不同侵袭力CAFs 细胞株的初步筛选及相关蛋白表达差异  26-34
小结  34-36
参考文献  36-41
文献综述  41-49
  参考文献  45-49
攻读学位期间发表论文情况  49-56
致谢  56

口腔癌中癌相关成纤维细胞体外生物学行为研究

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