学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

绿脓杆菌外毒素A对严重烧伤大鼠损伤效应的实验研究

作　者: 王晓云
导　师: 陈玉林；夏照帆
学　校: 第二军医大学
专　业: 外科学（烧伤）
关键词: 烧伤感染绿脓杆菌外毒素A（PEA）前炎性细胞因子免疫治疗多器官功能障碍综合症（MODS）
分类号: R644
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
下　载: 49次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

研究背景绿脓杆菌（PA）是创伤和免疫机能低下患者最易感染的病原菌之一，在烧伤感染中其检出率居首位，耐药谱广，致死亡率高，故一直是烧伤界极为重视的病原菌。已发现的PA毒力因子有十余种，如外毒素A（PEA）、内毒素（LPS）、胞外酶S、溶血物质、蛋白酶和杀白细胞素等，其中PEA为该菌毒力最强的毒力因子。20世纪60年代，Liu.P.V.首先发现PEA，并进行了纯化和鉴定，指出约90％的PA临床分离株可以产生PEA。PEA在细菌的衰亡期以酶前体的形式分泌，由613个氨基酸组成，具有对多种培养细胞的毒性和动物的致死作用，毒力是LPS的1万倍。在既后的研究中人们发现，PEA对宿主的损伤效应远远不止抑制细胞蛋白质合成的直接毒性作用，还可以引起中性粒细胞（GRAN）数目减少和杀菌力下降，抑制粒细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞的增殖，削弱机体的免疫系统，具有免疫抑制和诱导细胞凋亡的多种非直接细胞损伤机制，引起多脏器的组织坏死和功能损伤。因此，PEA在PA脓毒症中致死作用的研究日益受到重视。实验中发现，血中PEA水平与肿瘤坏死因子α（TNFα）及白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）等前炎性细胞因子的水平有密切关系，与LPS共同影响脓毒症患者全身炎症反应和多脏器功能障碍综合症（MODS）的发生和发展。临床观察中也发现，PA感染患者体内PEA抗体水平与患者的病情密切相关，体内PEA抗体水平高者，其病情较轻、存活率明显升高。因此，研究PEA对烧伤动物模型的损伤效应和PEA抗体的保护作用具有重要的临床意义和应用前景。研究目的对于大多数G菌来说，最重要和研究最多的毒力因子是LPS，而对于PA来说，除LPS外，PEA的直接细胞毒性、诱导细胞凋亡和削弱机体免疫力的毒性作用，及PEA与LPS的协同作用在PA脓毒性休克、全身炎症反应综合症（SIRS）和多脏器第二军医大学中文摘要硕士学位论文功能障碍综合症（MODS）的发生和发展中不容忽视。本研究通过对PEA引起的严重烧伤大鼠循环血免疫细胞数量和组成变化、前炎性细胞因子 hFa和 IL－la水平改变及脏器功能损伤的研究，探讨PEA对严重烧伤大鼠的损伤效应和可能机制。研究方法一．实验动物模型的制备和研究：严重烧伤Q0皿ll”烧伤）大鼠尾静脉注射 4us／200sBW、10us／200sBW和 20us／200gBW三个不同剂量的 PEA溶液，每 6 ’J’时观察动物的精神状态和死亡率，探索PEA引起严重烧伤大鼠脏器损伤至死亡的可能剂量范围，并确定PEA引起严重烧伤大鼠PEA毒血症脏器损伤模型的有效剂量，制备PEA引起实验动物损伤效应的毒血症模型。二．陀A对外周血免疫细胞数量和组成的影响：严重烧伤大鼠尾静脉注射 10Ug／200叨w的PEA溶液后1，3，6，12和24小时5个时相点，取抗凝血进行白细胞（hC）、淋巴细胞（LY）和中性粒细胞（GRAN）计数，并计算 LYM与 GRAN 的比值几／G），研究在体情况下 PEA对机体的整体免疫功能影响。三．PEA对循环血内前炎性细胞因子水平的影响：ELISA法检测PEA作用的不同时相点，循环血中前炎性细胞因子hF a和几－l。水平的改变，通过免疫组织化学方法显示备主要脏器内 INF a的靶位和半定量研究组织内 TNF a表达水平。四．PEA对重要脏器功能的影响：通过光镜、透射电镜等病理学诊断手段，和血中肝功能酶谱生化检测方法，观察PEA对重要脏器在细胞和亚细胞水平上的损伤效应。五．PEA抗体对PEA损伤的保护作用：将实验动物进行PEA抗体主动兔疫，观察其对PEA的免疫抑制、前炎性细胞因子水平改变和脏器功能损伤的保护作用。结果一．第一部分实验动物模型的制备和研究一次性注射10ug／200gBW的PEA给严重烧伤大鼠和20ug／200gBW以上的PEA 给假烫动物，均可引起实验动物的急性死亡。4fig／200gBW的PEA剂量不能引起两组动物48小时内死亡，对假烫鼠的精神状态无明显影响。选择10 fig乃00gBW的 PEA剂量研究 PEA弓起的急性损伤效应，4 Llg／200gBW的 PEA剂量用于研究 PEA弓 3 第二军医大学中文摘要硕士学位论文起的慢性损伤效应，制备正常和烧伤大鼠PEA损伤效应的毒血症模型。二．第二部分PEA对严重烧伤大鼠损伤效应的实验研究

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
前言  12-14
试剂与仪器  14-16
第一部分实验动物模型的制备和研究  16-21
  材料与方法  0-17
  结果  17-18
  讨论  18-21
第二部分 PEA对严重烧伤大鼠损伤效应的实验研究  21-65
  实验一 PEA对外周血免疫细胞数量和组成的影响  21-28
    材料与方法  21-22
    结果  22-24
    讨论  24-28
  实验二 PEA对循环血和脏器内TNF α水平的影响  28-44
    材料与方法  28-31
    结果  31-32
    讨论  32-44
  实验三 PEA对重要脏器功能的损伤作用  44-65
    材料与方法  44-46
    结果  46-50
    讨论  50-65
第三部分 PEA抗体对PEA损伤保护作用的实验研究  65-75
  材料与方法  65-66
  结果  66-67
  讨论  67-75
小结  75-76
参考文献  76-80
文献综述  80-90
发表论文  90-91
致谢  91

绿脓杆菌外毒素A对严重烧伤大鼠损伤效应的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文