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松香生物转化产酚类化合物及其活性研究

作　者: 李巧峰
导　师: 余旭亚
学　校: 昆明理工大学
专　业: 生物化工
关键词: 生物转化松香真菌酚类化合物活性
分类号: TQ351.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

生物转化技术以其反应的高效率性、高选择性、无毒、无污染、低能耗等优点而成为目前生物科学领域研究的热点,并已迅速发展应用到生活生产的各个领域和部门。本研究基于云南省丰富的松香资源和生物转化生产药物发展的现状,从云南省思茅地区采集松林腐殖质分离纯化真菌菌株,以松香为底物,利用生物转化技术对其进行转化,并对其转化产物进行分离纯化,活性检测,得到高活性的化合物。本实验从采集的样品中分离纯化得到91株真菌,对其中47株进行生物转化和活性跟踪,通过初筛,实验结果显示有25株菌株的转化产物粗体物对革兰氏阴性菌(大肠杆菌)和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和枯草芽孢杆菌)有不同程度的抑制作用,抑菌效果显著的有12株。经过复筛,选择抑菌效果最好的菌株A5+为最终的转化菌株,通过形态鉴定和分子鉴定,最终确定转化菌株A5+为毛霉菌亚门(Mucoromycotina)、毛霉目(Mucorales)、毛霉科未定种(Mucorales incertae sedis)、Umbelopsis属。接着对其转化条件进行了初步优化,确定了最佳的转化条件为底物浓度5.0g/L,助溶剂乙醇为培养基体积分数的3%,初始PH为6,转速140-180 rpm,温度28℃,转化时间5 d。在最佳反应条件下,利用目标转化菌株A5+进行大量振荡培养,通过活性跟踪,积累转化产物粗体物浸膏,经过醇沉法和多级萃取法,使用薄层层析、柱层析和高效液相色谱分析技术进行分离纯化,最后得到两个化合物SX-1和SX-2,通过核磁共振和质谱等分析技术,对其结构解析,得知均是酚类化合物,且可能化合物SX-2是SX-1的代谢产物。查阅文献,未曾有化合物SX-1的报道,初步证实化合物SX-1是新化合物。进一步对两个化合物活性进行检测,发现二者对试验中的革兰氏阴性和阳性菌均有较强的抑制作用,且得到了各自的最小半抑制浓度；对Hela肿瘤细胞也有很好的抑制能力。最后对转化产物(酚类化合物)的产生和活性及应用进行了初步的分析讨论,展望了生物转化松香生产酚类药物及其工艺的前景,以期为松香衍生物和酚类化合物的进一步研究提供有用的参考。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-10
插图和附表清单  10-12
缩略词表  12-13
第一章前言  13-25
  1.1 国内外松香的开发利用概述  13-20
    1.1.1 国内外松香的研究概况  13-18
    1.1.2 云南松香的发展现状  18-20
  1.2 生物转化生产药物及其先导化合物的最新研究进展  20-23
    1.2.1 生物转化简介  20-23
    1.2.2 生物转化在制药工业中的应用  23
  1.3 本课题的研究内容、技术路线及目的和意义  23-25
第二章目标转化菌株的筛选及其转化产物活性研究  25-50
  2.1 实验材料  25-27
    2.1.1 样品简介  25
    2.1.2 菌株  25
    2.1.3 病原指示菌  25-26
    2.1.4 供试肿瘤细胞  26
    2.1.5 培养基  26-27
    2.1.6 仪器设备  27
  2.2 实验方法  27-33
    2.2.1 松林腐殖质的采集  27-28
    2.2.2 菌株真菌的分离纯化  28
    2.2.3 真菌鉴定  28
    2.2.4 纯化菌株的振荡培养  28
    2.2.5 活性菌株的初筛  28-29
    2.2.6 活性菌株的复筛  29-31
    2.2.7 活性菌株发酵条件的优化  31-33
    2.2.8 活性菌株发酵产物大量积累  33
  2.3 实验结果  33-48
    2.3.1 菌株的分离纯化和形态鉴定结果  33
    2.3.2 初筛活性菌株结果  33-34
    2.3.3 复筛活性菌株结果  34-38
    2.3.4 筛选最终活性菌株A_5~+并做标准阳性对照实验  38-42
    2.3.5 菌株A_5~+的抗肿瘤活性实验  42-43
    2.3.6 菌株A_5~+生物转化条件的初步优化  43-48
    2.3.7 菌株A_5~+生物转化产物的大量积累  48
  2.4 本章小结  48-50
第三章活性化合物的分离纯化和鉴定  50-63
  3.1 实验材料  50
    3.1.1 实验仪器  50
    3.1.2 常用试剂  50
  3.2 实验方法  50-53
    3.2.1 形态鉴定  50
    3.2.2 分子鉴定  50-51
    3.2.3 活性化合物分离纯化  51-53
  3.3 实验结果  53-62
    3.3.1 鉴定结果  53-54
    3.3.2 活性菌株A5+产物的分离纯化  54-59
    3.3.3 两个化合物的结构解析  59-60
    3.3.4 两个化合物的活性跟踪  60-62
  3.4 本章小结  62-63
第四章讨论与展望  63-67
  4.1 生物转化产物的分析讨论  63-64
  4.2 两个酚类化合物活性的分析讨论  64-65
  4.3 本研究的创新点及展望  65-67
致谢  67-69
参考文献  69-75
附录A 攻读硕士期间发表论文目录  75-76
附录B 其他需要说明的内容  76-84

松香生物转化产酚类化合物及其活性研究

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