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对罗氏培养基进一步改良的初步研究

作　者: 于滨
导　师: 马郁芳
学　校: 大连医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 罗氏培养基改良分枝杆菌结核培养羧苄青霉素硒酸钠
分类号: R446.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

背景:以鸡蛋为基础的罗氏(Lowenstein Jensen,L-J)培养基作为培养结核分枝杆菌的一种固体培养基一直被广泛地应用于临床,它是目前培养结核分枝杆菌最为常用的培养基之一,也是最有代表性的一种,具有价廉、制作方法简便、便于观察菌落形态等特点。因为其成分内添加了抑制普通细菌生长的孔雀绿,所以罗氏培养基上罕有普通细菌(霉菌除外)生长的报道。然而,笔者在临床工作期间,无意中观察到一株链球菌(Streptococcus,以下简称为S)生长在罗氏培养基上,遂将该菌株保存以作研究。目的:以该链球菌菌株及结核分枝杆菌在新老两种罗氏培养基上的生长情况作为研究对象,以期对罗氏培养基作进一步地改良研究。[实验一]在罗氏培养基成分中添加不同的抑菌物质观察该链球菌与结核菌的生长情况方法:收集临床分离的人型(M.TB)、牛型(M.b)结核分枝杆菌、链球菌(S)各一株,H37Rv结核标准菌株作为质控菌种,共4株分别接种于添加50.0(mg/ml)羧苄青霉素(Carbenicillin,以下简称为C)和/或硒酸钠5、10、20(μg/ml)罗氏培养基上,以未作接种的该罗氏培养基作为空白对照,37±0.2℃培养4周观察菌落生长情况。结果:新改良的罗氏培养基中加入的羧苄青霉素(C)和一定量的硒酸钠对该链球菌均有不同程度的抑制作用,而含20(μg/ml)硒酸钠、羧苄青霉素(C)+ 10(μg/ml)硒酸钠或羧苄青霉素(C)+ 20(μg/ml)硒酸钠均可完全抑制该链球菌的生长;除含20(μg/ml)硒酸钠和羧苄青霉素(C)+ 20(μg/ml)硒酸钠两种罗氏培养基对3株结核分枝杆菌有轻度抑制作用外,其余均对结核分枝杆菌生长无明显影响。[实验二]随机选取30株结核分枝杆菌接种于新老两种改良罗氏培养基,观察其生长情况方法:随机选取我院近3个月来临床分离的30株结核分枝杆菌,分别接种于新老两种改良罗氏培养基上,37±0.2℃培养4周观察菌落生长情况。结果:30株结核分枝杆菌在两种培养基上全部生长,但两种培养基上的菌落生长面积并不完全相同,利用统计学软件SPSS 10.0对二者进行Wilcoxon符号秩和检验,结果P=0.504(0.767/0.748),均大于0.05,在统计学上无显著性差异。[实验三]将384例临床标本分别接种于新老两种酸性罗氏培养基观察分析培养结果方法:选取我院2008年1月1日至1月31日间来源于临床采集的各类标本384例,分别接种于新老两种酸性罗氏培养基上,37±0.2℃培养4周观察结果。结果:384例临床标本经37±0.2℃培养4周后,有98例证实培养阳性,其中在原酸性罗氏培养基(OLD)上分离培养出人型结核分枝杆菌(M.TB)45例,牛型结核分枝杆菌(M.b)32例,非典型结核分枝杆菌(MOTT)16例;在新酸性罗氏培养基(NEW)分离培养出人型结核分枝杆菌(M.TB)49例,牛型结核分枝杆菌(M.b)33例,非典型结核分枝杆菌(MOTT)16例,但原酸性罗氏培养基(OLD)污染9例,而新酸性罗氏培养基(NEW)仅为4例。经χ2检验,两种酸性罗氏培养基作为结核分枝杆菌的分离培养基无显著性差异。结论:标本的消化(4% NaOH或4% H2SO4前处理)及罗氏培养基内所添加的孔雀绿并不能完全抑制普通细菌的生长,其对结核菌培养仍具有一定干扰性,因此需要对罗氏培养基作进一步地改良。在新改良的罗氏培养基(酸性、中性均可)中所添加的羧苄青霉素50.0(mg/ml)、10(μg/ml)硒酸钠对结核分枝杆菌的生长无明显影响,而对普通细菌却有一定的抑制作用,通过进一步实验研究可将该成分作为改良罗氏培养基的新配方。

全文目录

一、正文  5-28
  （一）中文摘要  5-7
  （二）英文摘要  7-9
  （三）前言  9-10
  （四）实验一在罗氏培养基成分中添加不同的抑菌物质观察该链球菌与结核菌的生长情况  10-17
    材料与方法  10-12
    结果  12-14
    讨论  14-16
    结论  16-17
  （五）实验二随机选取 30 株结核分枝杆菌接种于新老两种改良罗氏培养基,观察其生长情况  17-21
    材料与方法  17-18
    结果  18-19
    讨论  19-20
    结论  20-21
  （六）实验三将 384 例临床标本分别接种于新老两种改良罗氏培养基观察分析培养结果  21-27
    材料与方法  21-23
    结果  23-24
    讨论  24-26
    结论  26-27
  （七）参考文献  27-28
二、文献综述  28-36
  （一）综述  28-33
  （二）简报  33-35
  （三）参考文献  35-36
三、致谢  36-37

对罗氏培养基进一步改良的初步研究

内容摘要

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