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电针对急性脊髓损伤大鼠24h差异蛋白质组学及SOD含量变化的机理研究

作　者: 苑晓晨
导　师: 李志刚
学　校: 北京中医药大学
专　业: 针灸推拿学
关键词: 电针急性脊髓损伤差异蛋白质组学 SOD CBS运动联合计分法
分类号: R245.97
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

急性脊髓损伤(Acute Spinal Cord Injury,ASCI)是威胁人类生命的主要损伤性疾病之一。其发病率、致残率、死亡率都很高,每年各国对本病的基础和临床研究均投入了大量的精力,但是其发病机制尚不清楚,仍处于探索阶段。对于急性脊髓损伤的临床治疗,目前还没有特效的方法。针刺作为治疗急性脊髓损伤的有效方法之一,以其独特性发挥了重要作用。本研究选用改进的Allen’s打击装置制造脊髓损伤大鼠模型,旨在应用适宜频率参数的电针治疗,探讨其改善急性脊髓损伤大鼠受损脊髓状态的分子机制。对损伤部位的脊髓组织进行SOD含量的检测;取损伤部位脊髓组织进行蛋白质组学分析,找出相关差异蛋白。探讨电针在该模型上产生疗效的可能的神经化学机制,并在蛋白质组学的角度上探讨其机制,并现将主要结果简述如下:1.损伤局部组织SOD含量:24h后对大鼠进行治疗,然后处死动物取出损伤段脊髓,测定SOD的浓度。发现(1)①与空白组比较:模型组和药物组含量下降,且有极显著性差异。②与空白组比较:电针组含量下降,有显著性差异。(2)与模型组比较:电针组和药物组无差异,但是有增加的趋势。2.对大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助Mascot软件从中找出差异表达蛋白质点。应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定。结果:成功发现个8蛋白质点,表达水平具有显著性差异变化。在已发现的蛋白点中,成功鉴定出7种蛋白质:①磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase)(TPI)②还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-脱氢酶复合体Ⅰ-亚复合物10(subcomplex 10)③磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglycerate mutase 1)④核苷二磷酸激酶(NDPK)⑤E2泛素连接酶(E2N)⑥神经丝亚单位(NF-M)⑦DJ-1蛋白。通过本动物实验可见,针刺对早期急性脊髓损伤具有一定的治疗效果。鉴定出的蛋白质可能通过细胞的能量代谢,蛋白质的合成和水解,自由基的产生和清除,及其神经细胞骨架重建等途径参与了ASCI的损伤及修复过程。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-8
主要缩略词表  8-9
第一部分综述部分  9-28
  综述一自由基综述  9-22
    1. 自由基概况  9-14
      1.1 自由基的定义  9-10
      1.2 自由基的产生  10-11
      1.3 自由基的三个特点  11
      1.4 自由基的双重作用  11-12
      1.5 自由基对生命大分子的损害  12-13
      1.6 自由基与神经系统疾病  13
      1.7 对自由基的研究现状  13-14
    2. 自由基与急性脊髓损伤  14-16
      2.1 概况  14-15
      2.2 氧化应激反应与急性脊髓损伤的中医辨证分型  15-16
    3. 针刺的抗氧化研究  16-17
      3.1 针刺对脑血管疾病的抗氧化作用  17
      3.2 针刺对血管性痴呆的抗氧化作用  17
    参考文献  17-22
  综述二蛋白质组学技术及其在神经系统疾病中的应用  22-28
    1 蛋白质组学的概念  22-23
    2 蛋白质组学的研究技术  23-25
      2.1 蛋白质分离技术  23
      2.2 蛋白质鉴定技术  23-24
      2.3 蛋白质组学信息查询技术  24
      2.4 在神经系统疾病中的应用  24-25
      2.5 在神经病学应用时出现的问题  25
    3. 结语  25-26
    参考文献  26-28
第二部分实验研究  28-45
  1. 材料与方法  28-29
    1.1 实验动物及分组  28
    1.2 造模  28
    1.3 治疗  28-29
  2. 电针对大鼠脊髓损伤后局部组织内SOD含量的研究  29-30
    2.1 SOD的检测方法  29
    2.2 数据处理方法  29
    2.3 结果  29-30
  3. 电针对大鼠脊髓损伤后局部组织内差异蛋白质组学的研究  30-45
    3.1 仪器  30-31
    3.2 试剂  31-32
    3.3 全蛋白提取方法  32
    3.4 大鼠脊髓样品的蛋白定量  32-34
    3.5 2D电泳方法  34-35
    3.6 银染图谱  35-39
    3.7 考染的胶内酶切  39-40
    3.8 凝胶图像采集与分析  40
    3.9 差异表达蛋白质点的质谱鉴定  40-41
    3.10 结果  41-45
第三部分讨论  45-51
  1. 电针对大鼠脊髓损伤后局部组织内SOD含量研究的讨论  45
  2. 电针对大鼠脊髓损伤后局部组织内差异蛋白质研究的讨论  45-48
  3. 探讨差异蛋白质与急性脊髓损伤中医辨证分型  48-49
    3.1 差异蛋白点的变化与阳气暴脱证  48
    3.2 差异蛋白点的变化与血瘀证  48-49
  4. 结论  49
  参考文献  49-51
致谢  51-52
个人简历  52

电针对急性脊髓损伤大鼠24h差异蛋白质组学及SOD含量变化的机理研究

内容摘要

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