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细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗的构建及免疫学研究
作 者: 刘小荣
导 师: 景涛；祝秉东
学 校: 兰州大学
专 业: 病原生物学
关键词: 细粒棘球绦虫 Eg95 卡介苗 耻垢分枝杆菌 疫苗 体液免疫
分类号: R392
类 型: 硕士论文
年 份: 2008年
下 载: 43次
引 用: 0次
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内容摘要
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目的:分别构建细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型卡介苗及耻垢分枝杆菌疫苗及免疫学研究。方法:分别以卡介苗(BCG)基因组DNA和PGEX-4T-Eg95为模板,PCR扩增获120bp的BCG抗原85B信号肽序列和423bp的Eg95基因序列。先将Eg95基因序列定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261,构建非分泌型重组质粒pMEg95。再将BCG-Ag85B信号肽序列定向克隆至pMEg95,构建分泌型重组质粒pSMEg95。电穿孔法将两型重组质粒分别导入BCG菌及耻垢分枝杆菌。分别用两型重组疫苗免疫小鼠,于第五周和第八周用ELISA法检测体液免疫指标。结果:双酶切、PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因Eg95序列和Ag85B信号肽序列正确插入载体pMV261,细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型BCG-Eg95和M.s-Eg95疫苗构建成功。SM型酶免分析仪检测第五周和第八周的IgG1和IgG2a显示,分泌型重组疫苗较非分泌型重组疫苗抗体效价高;重组BCG较重组M.s的抗体效价高。结论:构建了含有Eg95基因序列和BCG-Ag85B信号肽序列的细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型BCG-Eg95和M.s-Eg95分枝杆菌疫苗。比较两型重组疫苗免疫小鼠后体液免疫水平,重组BCG-Eg95和M.s-Eg95疫苗可在BCG和M.s中表达Eg95抗原蛋白;分泌型重组疫苗较非分泌型重组疫苗免疫效果强;作为疫苗载体,BCG较M.s具有更好的免疫效果。
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全文目录
中文摘要 4-6
英文摘要 6-7
缩略词表 7-9
研究背景 9-22
第一部分 细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型质粒的构建及鉴定 22-35
材料和方法 22-30
结果 30-35
第二部分 细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗的构建及鉴定 35-39
材料和方法 35-37
结果 37-39
第三部分 两型重组分枝杆菌疫苗免疫小鼠后体液免疫的检测 39-49
材料和方法 39-43
结果 43-49
讨论 49-51
结论 51-52
参考文献 52-56
附图 56-57
在校期间发表论文 57-58
致谢 58-59
综述 59-64
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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