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目的:肾间质纤维化(RIF)是由多种原因引起的细胞外基质(ECM)在肾间质内过度沉积和间质成纤维细胞的增生而形成,是各种肾脏疾病进展到终末期的共同途径和主要病理基础。表达α-SMA的肌成纤维细胞(MyoF)是合成ECM的主要细胞,已有研究表明在RIF过程中约36%的MyoF是由小管上皮细胞转化而来,这过程称为小管上皮细胞转分化(EMT)。TGF-β1是公认的致纤维化因子,能通过多种信号传导途径诱导EMT的发生和发展。ILK是其信号传导途径的效应分子,介导了TGF-β1诱导肾小管EMT的各个关键步骤,最终导致肾间质纤维化的发生。本研究主要通过组织病理学观察、免疫组织化学和RT-PCR方法,了解ILK、α-SMA及TGF-β1在肾间质纤维化动物模型中的表达,探讨它们与肾间质纤维化形成的关系。方法:1.肾间质纤维化动物模型的建立:选取清洁级SD大鼠72只,随机分为三组:正常组、手术组、假手术组,手术组采用单侧输尿管结扎方法,建立肾间质纤维化模型,即UUO模型,手术组大鼠常规麻醉后在近左肾下极处游离并结扎左输尿管;假手术组大鼠仅行开腹术游离左输尿管;正常组不做任何处理。各组大鼠分别于术后1、3、7、14天处死,取其左肾,观察左肾大体形态,光镜下观察肾脏病理改变及间质纤维化程度。2.用免疫组织化学技术检测肾间质中的ILK和TGF-β1、α-SMA的表达情况,进一步分析各组之间ILK和TGF-β1、α-SMA表达量与肾间质损伤程度之间的关系,以及ILK和TGF-β1、α-SMA彼此之间的相关关系。3.用逆转录方法半定量测定ILKmRNA在UUO模型中的表达量,并分析其与肾间质损害程度的关系。结果:1.采用单侧输尿管结扎术构建肾间质纤维化动物模型成功,未见大鼠死亡。2.肾组织形态学改变:与对照组相、假手术组比,UUO组大鼠肾脏明显肿大,肾皮质变薄,肾盂积水,并随着时限的延长而加重。3.免疫组化分析显示:ILK在正常肾组织中几乎无阳性表达,UUO模型中,ILK主要表达在肾间质,随着肾间质病变程度加重,其阳性表达面积显著增加,各组之间表达有显著性差异(P<0.001),与肾间质病变程度呈显著正相关关系(r=0.842,P<0.001);TGF-β1在正常肾间质中仅有微量的表达,随着肾间质病变程度的加重表达逐渐增加,各组之间TGF-β1的表达有显著性差异(P<0.001),和肾间质病变程度呈显著正相关关系(r=0.892,P<0.001) ;α-SMA在正常肾组织中,仅表达于血管平滑肌肌层,在肾小管上皮细胞胞浆有微量表达,随肾间质病变加重表达增强各组之间α-SMA的表达有显著性差异(P<0.001),和肾间质病变程度之间有正相关关系(r=0.854,P<0.001)。结论:1.ILK作为TGF-β1的下游信号因子参与EMT,EMT可能是致肾间质纤维化的一个重要方式。2.TGF-β1可能在RIF的发生中起重要作用,EMT可能是TGF-β1致肾间质纤维化的一个重要途径。3.α-SMA作为MyoF的标志蛋白参与EMT,在肾间质纤维化发生中起重要作用。4.在各种病变程度的肾小管间质中,ILK和TGF-β1、α-SMA的表达有正相关关系,推测ILK可能在TGF-β1介导的EMT过程中起到重要的作用。
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