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甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）分子进化机制研究

作　者: 陈宏斌
导　师: 王辉；陈民钧；徐英春；张小江
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: MRSA 克隆进化分子分型 hVISA 病例对照研究 agr
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的研究MRSA进化的基本规律,勾勒出MRSA进化的概略图。通过病例对照研究获得我国hVISA感染的相关临床信息并对危险因素和病死率相关性进行分析。初步研究hVISA耐药机制相关基因。方法收集北京协和医院1994-2008年466株非重复金黄色葡萄球菌(包括302株MRSA和164株MSSA),进行SCCmec、spa、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分析(MLST)分型。采用BHIT5(含替考拉宁5μg/ml的脑心浸液琼脂平皿)、BHIV6(含万古霉素6μg/ml的脑心浸液琼脂平皿)和MET法筛选MRSA中的hVISA并使用改良PAP-AUC(菌群谱型分析)法进行确认。通过病例调查表(CRF)的形式收集hVISA组和对照组的临床相关信息,使用student t检验、Mann-Whitney检验、χ2检验以及fisher精确检验等统计方法对病例资料进行回顾性分析。采用实时荧光定量PCR研究hVISA耐药相关基因agr的转录水平。结果302株MRSA共发现12个spa型和9个STs型。在1994-2000年之间,MRSA最流行的克隆是ST239-MRSA-Ⅲ-spa t037;自从2000年开始,ST239-MRSA-Ⅲ-spa t030很快取代以前的优势克隆t037,并且成为最流行的克隆。在2002年,另一个MRSA克隆ST5-MRSA-Ⅱ-spa t002出现,并且一直维持一个很低的流行水平。164株MSSA共发现62个spa型和40个STs型。在MSSA中,ST398是最常见的STs型,其他依次为ST59、ST7、ST15和ST1。一些MSSA基因型(包括ST398、ST1、ST121和ST59与一些流行的CA-MRSA基因型相同。MLST eBURST分析显示ST5. ST59和ST965克隆共同存在于MRSA和MSSA中,这提示MRSA可能通过MSSA获得SCCmec进化而来。依照临床病例资料,2株pvl阳性菌株ST59-MRSA-Ⅳ为CA-MRSA。hVISA组与VSSA组在万古霉素MIC水平上存在显著差异(80%versus 24.9%,P<0.001),hVISA组万古霉素MIC值高于VSSA组。回顾性病例对照研究发现,hVISA组和VSSA组在临床治疗、结局及感染相关病死率方面无差异。尽管如此,hVISA组与VSSA组住院天数存在差异(P=0.025),hVISA感染的患者住院时间延长。与相应的VSSA相比,10株hVISA中有9株RNAⅢ的转录水平下调,其中下调最大的达1000倍。结论新出现的MRSA克隆ST239-MRSA-Ⅲ-spa t030很快取代了以前的旧克隆ST239-MRSA-Ⅲ-spa t037,这说明这15年间北京协和医院MRSA流行克隆发生了一个快速的变迁。hVISA组万古霉素MIC水平显著高于VSSA组,但多种新型抗菌药物对其具有良好活性。hVISA感染与万古霉素治疗失败无相关性,hVISA感染的患者住院时间延长,对hVISA临床意义的研究可能需要进行大样本的前瞻性队列研究。agr转录水平的下调与万古霉素的敏感性下降相关,但是关于hVISA具体的耐药机制还需要更进一步深入的研究。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-12
第一部分 1994-2008年北京协和医院MRSA进化和分子特征研究  12-35
  材料和方法  12-25
  结果  25-27
  讨论  27-35
第二部分 hVISA的筛选与回顾性病例对照研究  35-47
  材料和方法  35-38
  结果  38-44
  讨论  44-47
第三部分 hVISA耐药机制相关基因研究  47-56
  材料和方法  47-50
  结果  50-54
  讨论  54-56
全文结论  56-57
参考文献  57-62
综述  62-70
研究生期间发表的论文列表  70-71
附录  71-95
个人简历  95-97
致谢  97-98

甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）分子进化机制研究

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