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二甲基甲酰胺与两种多糖对猪精液冷冻保存效果的研究

作　者: 刘宏
导　师: 李青旺
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 猪精液冷冻保存 DMF 多糖酶类
分类号: S828
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

猪精液冷冻保存技术是随着人工授精技术的广泛应用而逐渐发展起来的,但目前冻精用于猪人工授精的使用率不足1%。这主要是由于猪精子对降温非常敏感,冷冻解冻后异常精子数较多、精子活率及受精能力降低等。为了进一步改善冷冻解冻后猪精液品质,本试验从渗透性和非渗透性冷冻保护剂以及卵黄三方面对稀释液进行改进,用二甲基甲酰胺(DMF)替代常规冷冻保护剂甘油,用鸽蛋卵黄替代传统的鸡蛋卵黄,并添加昆布多糖和丹参多糖,以冷冻解冻后精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整率、顶体完整率和DNA完整率等作为评价指标,利用计算机辅助精液分析系统(CASA)、碘化丙啶(PI)、罗丹明123、低渗肿胀试验(HOST)、异硫氰酸荧光素连接的花生凝集素(PITC-PNA)及单细胞凝胶电泳(SCGE)等对精子质量进行评估。研究DMF、两种多糖和鸽蛋卵黄对猪精液的冷冻保护作用,并且探讨了冷冻保护剂对猪精液冷冻前后SOD酶活力、总抗氧化能力(T-AOC)和精子胆固醇含量变化的影响。本论文所得结果如下:1.当DMF添加量为5%,4℃平衡时间为90 min时,解冻后精子活力、活率、线粒体活性、顶体完整率和质膜完整率均显著高于3%甘油对照组(P<0.05)。本试验结果表明DMF可以替代甘油用于猪精液冷冻保存,且能改善冷冻解冻后精液品质。2.在常规冷冻基础液TCG中添加0.8mg/mL昆布多糖和0.4mg/mL丹参多糖可显著提高冻后精子活力、活率、线粒体活性、顶体完整率、质膜完整率(P<0.05),而且昆布多糖和丹参多糖能提供有效的抗氧化能力。3.猪精液冷冻保存过程中,在常规冷冻基础液TCG中添加15%鸽蛋卵黄,冻后猪精子活率、顶体完整率、质膜完整率和DNA完整率均显著高于20%鸡蛋卵黄对照组(P<0.05)。本试验结果表明鸽蛋卵黄可以替代鸡蛋卵黄用于猪精液冷冻保存,且取得了较好的冷冻保护效果。4.在平衡后、解冻后,精子内SOD酶活力、总抗氧化能力(T-AOC)和胆固醇含量均有所下降。添加鸽蛋卵黄后,精子SOD酶活力、T-AOC和胆固醇含量均有所提高,15%鸽蛋卵黄组显著高于对照组(P<0.05);5% DMF组SOD酶活力和T-AOC均显著提高(P<0.05),但DMF对精子胆固醇含量影响不大;添加0.6～0.8mg/mL昆布多糖和0.4～0.6mg/mL丹参多糖后,精子SOD酶活力、T-AOC和胆固醇含量均显著提高(P<0.05)。

全文目录

摘要  6-7
ABSTRACT  7-12
文献综述  12-23
  第一章猪精液冷冻保存技术研究进展  12-23
    1.1 猪精液冷冻保存研究简史  12-14
    1.2 猪精液冷冻保存机理的研究  14-17
      1.2.1 猪精子冷冻保存机理  14
      1.2.2 精液冷冻保存过程  14-15
      1.2.3 冷冻解冻过程中的损伤  15-16
      1.2.4 精液稀释液与冷冻保护剂  16-17
      1.2.5 影响猪精液冷冻保存效果的因素  17
    1.3 精液品质检测研究进展  17-23
      1.3.1 精子密度和形态学检测  18
      1.3.2 精子活力检测  18
      1.3.3 精子活率检测  18
      1.3.4 精子质膜完整性检测  18-19
      1.3.5 精子线粒体活性检测  19-20
      1.3.6 精子顶体完整性检测  20
      1.3.7 精子核DNA 损伤检测  20-21
      1.3.8 精子获能检测  21
      1.3.9 精子受精能力检测  21-22
      1.3.10 精子酶活力检测  22-23
试验研究  23-47
  第二章二甲基甲酰胺（DMF）对猪精液冷冻保存效果的影响  23-30
    2.1 试验材料与方法  23-25
      2.1.1 主要试剂及仪器  23
      2.1.2 溶液配制  23
      2.1.3 精液采集与处理  23-24
      2.1.4 精液冷冻与解冻  24
      2.1.5 冷冻-解冻后精子质量评定  24
      2.1.6 冷冻保护剂对精子毒性的检测  24
      2.1.7 试验设计  24-25
      2.1.8 数据分析  25
    2.2 结果与分析  25-28
      2.2.1 不同平衡时间对猪精子活力的影响  25
      2.2.2 不同DMF 添加量对猪精液冷冻-解冻后精子活力、活率和线粒体活性的影响  25-26
      2.2.3 不同 DMF 添加量对猪精液冷冻-解冻后顶体完整率和质膜完整率的影响  26-27
      2.2.4 冷冻保护剂对猪精子毒性的分析  27-28
    2.3 讨论  28-29
    2.4 小结  29-30
  第三章昆布多糖和丹参多糖对猪精液冷冻保存效果的研究  30-35
    3.1 试验材料与方法  30-31
      3.1.1 丹参多糖的提取  30
      3.1.2 主要试剂及仪器  30-31
      3.1.3 溶液配制  31
      3.1.4 精液采集与处理  31
      3.1.5 精液冷冻与解冻  31
      3.1.6 冷冻-解冻后精子质量评定  31
      3.1.7 试验设计  31
      3.1.8 数据分析  31
    3.2 结果与分析  31-33
      3.2.1 昆布多糖对冷冻解冻后猪精子质量的影响  31-32
      3.2.2 丹参多糖对冷冻解冻后猪精子质量的影响  32-33
    3.3 讨论  33-34
    3.4 小结  34-35
  第四章鸽蛋卵黄对猪精液冷冻保存效果的影响  35-40
    4.1 试验材料与方法  35-36
      4.1.1 鸽蛋卵黄的制备  35
      4.1.2 主要试剂及仪器  35
      4.1.3 溶液配制  35
      4.1.4 精液采集与处理  35
      4.1.5 精液冷冻与解冻  35
      4.1.6 冷冻-解冻后精子质量评定  35-36
      4.1.7 试验设计  36
      4.1.8 数据分析  36
    4.2 结果与分析  36-38
      4.2.1 鸽蛋卵黄（PY）替代鸡蛋卵黄（EY）对冷冻-解冻后精子活率的影响  36
      4.2.2 鸽蛋卵黄（PY）替代鸡蛋卵黄（EY）对冷冻-解冻后精子顶体完整率的影响  36
      4.2.3 鸽蛋卵黄（PY）替代鸡蛋卵黄（EY）对冷冻-解冻后精子质膜完整率的影响  36-37
      4.2.4 鸽蛋卵黄（PY）替代鸡蛋卵黄（EY）对冷冻-解冻后精子DNA 完整率的影响  37-38
    4.3 讨论  38-39
    4.4 小结  39-40
  第五章猪精液冷冻前后SOD 酶活力、T-AOC 和精子胆固醇含量的变化  40-47
    5.1 试验材料与方法  40-42
      5.1.1 主要仪器及试剂  40-41
      5.1.2 精液处理与冷冻  41
      5.1.3 SOD 酶活力和T-AOC 的测定  41
      5.1.4 精子胆固醇含量测定  41
      5.1.5 试验设计  41-42
      5.1.6 数据分析  42
    5.2 结果与分析  42-45
      5.2.1 鲜精、平衡后和解冻后猪精子内 SOD 酶活力、T-AOC、精子胆固醇含量的测定  42-43
      5.2.2 不同浓度鸽蛋卵黄对猪精子冷冻前后SOD 酶活力、T-AOC 和精子胆固醇含量的影响  43-44
      5.2.3 不同浓度DMF 对猪精子冷冻前后SOD 酶活力、T-AOC 和精子胆固醇含量的影响  44-45
      5.2.4 不同浓度昆布多糖和丹参多糖对猪精子冷冻前后SOD 酶活力、T-AOC 和精子胆固醇含量的影响  45
    5.3 讨论  45-46
    5.4 小结  46-47
结论  47-48
创新点  48-49
参考文献  49-57
附录  57-61
缩略词中英文对照表  61-62
致谢  62-63
作者简介  63

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