学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

人乳头瘤病毒快速分型的目视化基因芯片技术研究及应用

作　者: 郭森
导　师: 陈超；李铮
学　校: 西北大学
专　业: 微生物
关键词: 人乳头瘤病毒 胶体金-探针 胶体金 多重不对称PCR 目视化 基因芯片
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 118次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


研究背景：目前已知宫颈癌的发病主要与人乳头瘤病毒(HPV)的高癌型感染有关。据统计全球每年有25万以上的妇女死于宫颈癌,宫颈癌是女性的第二位高发癌。随着每年宫颈癌和生殖器疣的患病率增加,对HPV感染的筛查有重要的意义。为了满足我国现阶段宫颈癌的防治需要,对妇女高危人群中宫颈糜烂患者和外生殖器部位尖锐湿疣的HPV感染分型和定量的流行病学调查与研究,对HPV的传播、宫颈癌的癌前诊断及预防提供重要依据,本项目的目的在于构建高通量、快速、灵敏且特异的HPV基因分型检测芯片系统。方法：本研究以目视化基因芯片为平台,引入多重不对称PCR及胶体金银染着色技术,以13种高、低危人乳头瘤病毒为模板,建立了可目视化基因分型的新方法。我们将样本病毒基因提取出来之后,利用通用引物GP5/GP6对基因组进行不对称扩增；设计两种探针,一种称之为捕获探针,在探针的5’末端进行氨基修饰,使其能和玻片连接,捕获探针用于和目的片段结合；另外一种探针称之为检测探针,在探针的3’端进行巯基修饰,使其能和胶体金形成共价连接,检测探针为非限制性引物的反义链可以和目的片段互补结合；在杂交过程中捕获探针和检测探针同时与目的片段相结合,胶体金就间接的标记到目的片段上,通过显色液银染显色,就会在芯片上出现一个可以肉眼观测的黑色或灰色斑点,通过平板扫描仪就可以对结果进行记录和分析。结果：1.在检测中我们引入了β球蛋白基因作为系统的阳性指控。在对100例临床样本的检测种目视化芯片检测法与细胞学检测法的阳性率间无显著性差异(P>0.05)。2.检测探针浓度优化为1μM-5μM之间做为后期实验的探针最佳点样浓度。3.在不对称引物比例上经过试验验证限制性引物和非限制性引物比例为1：20时效果最好,单链产物最多。4.通过软件计算的数据可以得出在病毒模板稀释10-9时还有信号产生,银染时间为10min5.稳定1 mL lOnm纳米金(A520=0.842)的巯基修饰探针的用量为0.4μg。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-9
第一章 综述  9-21
  1 人乳头瘤病毒概述  9-12
    1.1 人乳头瘤病毒的结构和功能  9
    1.2 人乳头瘤病毒的致病机制  9-10
    1.3 影响人乳头瘤病毒感染的因素  10-11
    1.4 人乳头瘤病毒的分类  11-12
  2 人乳头瘤病毒诊断技术的现状  12-14
    2.1 原位杂交法  12
    2.2 型特异性PCR检测法  12
    2.3 共有或通用引物PCR检测法  12-13
    2.4 杂交捕获法(HC)  13
    2.5 HPV基因芯片检测法  13-14
    2.6 HPV DNA-纳米金探针目视化芯片分型检测方法  14
  3 DNA-纳米金探针目视化基因芯片技术  14-19
    3.1 纳米金及其在核酸标记中的应用  14-16
    3.2 生物芯片技术简介  16-18
    3.3 生物芯片在医疗中的应用趋势  18-19
  4 本研究的背景、目的及意义  19-21
第二章 目视化人乳头瘤病毒芯片基因分型方法的建立  21-44
  1 材料与仪器  21-24
    1.1 所需材料及试剂  21-24
  2 实验方法  24-33
    2.1 通用引物和寡核苷酸探针的设计  25-26
    2.2 技术路线  26
    2.3 目的片段的扩增  26-28
    2.4 胶体金的制备及表征  28-29
    2.5 胶体金探针的制备  29
    2.6 寡核苷酸芯片的制备  29-31
    2.7 样品的处理  31-32
    2.8 芯片杂交、清洗、染色及结果分析  32-33
  3 实验结果  33-44
    3.1 质粒的鉴定结果  33-34
    3.2 胶体金的物理表征结果  34-36
    3.3 胶体金标记探针的最小浓度  36-37
    3.4 胶体金标记探针结合型稳定性结果  37-38
    3.5 不对称引物最适比例的确定梯度  38-40
    3.6 芯片检测灵敏度实验  40-41
    3.7 探针最佳点样浓度的确定  41-42
    3.8 阳性质粒PCR产物与胶体金标记探针的杂交反应结果  42-44
第三章 目视化人乳头瘤病毒液态芯片基因分型方法临床应用的初步研究  44-46
  1 临床样本收集  44
  2 两种不同HPV检测方法的对照实验  44
    2.1 人乳头瘤病毒目视化芯片基因分型方法  44
  3 实验对照结果  44-46
第四章 讨论与总结  46-48
参考文献  48-53
致谢  53-54
攻读硕士期间的研究成果  54-55

相似论文

  1. 利用GST-标签大肠杆菌表达系统制备HPV 58 E7蛋白,R392
  2. 猪瘟病毒和猪2型圆环病毒基因芯片检测技术研究,S858.28
  3. 水稻条纹病毒土传媒介的研究,S435.111.42
  4. 湖羊早期妊娠诊断免疫胶体金层析试纸条的初步研制,S858.26
  5. 贵州省部分少数民族妇女宫颈癌的HPV谱研究,R737.33
  6. 尖锐湿疣人乳头瘤病毒的基因分型及微卫星DNA改变,R737.33
  7. 人乳头瘤病毒检测在宫颈病变筛查和随访中的意义,R737.33
  8. 阴道镜下宫颈活检在宫颈病变诊断中的价值（附500例临床病例分析）,R737.33
  9. 利谷隆致胚胎期SD大鼠睾丸发育整体基因表达水平的研究,Q75
  10. 基于粒子群优化的Fuzzy c-mean聚类算法的基因芯片图像处理,TP391.41
  11. 人乳头瘤病毒16型E7蛋白单克隆抗体的研制,R737.33
  12. 创伤对成年及幼年羊关节软骨基因表达谱影响的研究,S826
  13. 应用基因芯片技术研究心血管活性药物导致心肌损伤的机理,R96
  14. 机械通气所致急性肺损伤对大鼠昼夜节律改变和肺组织基因表达的影响,R563.8
  15. 大前庭水管综合征患者基因芯片法与DNA测序法基因诊断的对比研究,R764
  16. 宫颈鳞癌转移相关miRNA表达谱的初步研究,R737.33
  17. HPV16型E6蛋白在外阴上皮内非瘤样病变和外阴鳞癌中的表达,R737.35
  18. 男（雄）性雄激素缺乏与肥胖、脂类代谢基因之间关系的研究,R589.2
  19. 包皮组织中人乳头瘤病毒DNA的检测和TK1、ARPCⅡ表达及其意义,R362
  20. 力生长因子E肽（MGF-Ct24E）与应力作用对成骨细胞基因表达影响的基因芯片分析,R329
  21. 睡眠剥夺问题的基因共表达网络分析方法研究,Q41

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 人体病毒学（致病病毒）
© 2012 www.xueweilunwen.com