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桑枝皮多糖的制备、结构鉴定及其抗氧化活性分析

作　者: 贺天珍
导　师: 张雨青
学　校: 苏州大学
专　业: 生物物理学
关键词: 桑枝皮多糖结构抗氧化活性糖醛酸
分类号: S888.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本文采用热水浸提法从鲁桑(Morus multicaulis Perr.)栽培种—湖桑32号的桑树枝条皮中提取到粗多糖,其得率达到28.5%。采用色谱、光谱、质谱、核磁共振谱以及其他各种化学手段对桑枝皮多糖的组成及其结构进行了分析。桑枝皮粗多糖经DEAE52-纤维素柱和Sephadex G-100柱分离得到两种水溶性多糖MBBP-1和MBBP-2,在桑枝皮中质量比约为2:1。红外光谱分析显示,这两种桑枝皮多糖均为β-D-吡喃糖;经高碘酸氧化和Smith降解方法分析初步推测,MBBP-1多糖的主链由(1→3)-连接的葡萄糖构成,鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖构成支链或主链的末端残基。这种多糖水解后经高效液相色谱(HPLC)和气相色谱-质谱(GC-MS)分析表明,它是由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖等6种单糖组成,其摩尔比为4.53:2.49:4.38:4.67:17.85:5.88。而第二种桑枝皮水溶性多糖MBBP-2的主链构成与第一种多糖不同,它是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖构成,以(1→6)-连接的鼠李糖和(1→2)-连接的阿拉伯糖组成主链的核心。阿拉伯糖、甘露糖和半乳糖组成支链或主链的末端残基。同样HPLC和GC-MS分析表明,这种多糖由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖及半乳糖醛酸组成,其摩尔比为26.85:13.8:3.14:4.4: 6.1:3.19:4.9。经HPLC凝胶过滤色谱分析表明, MBBP-1和MBBP-2的相对分子质量相仿,分别为114.901 kDa和124.785 kDa。通过对总抗氧化能力、还原力、对羟基自由基的清除能力以及清除DPPH自由基能力等生化指标的分析与测定,研究了桑枝皮内这二种水溶性多糖的体外抗氧化活性。结果表明MBBP-2的各种抗氧化活性均比MBBP-1的活性高,这可能与该多糖的主链糖苷键的连接方式、分子量及聚合度大小、侧链的分支度及精细结构和构象不同等有关;从氧化还原反应原理的角度分析,MBBP-2中因含有8.2%的半乳糖醛酸很可能是其较MBBP-1具有更强的抗氧化活性的主要原因。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-11
第一章引言  11-22
  1.1 多糖的提取方法  11-12
    1.1.1 溶剂提取法  11
    1.1.2 酸碱提取法  11-12
    1.1.3 生物酶提取法  12
  1.2 多糖的结构分析方法  12
  1.3 多糖的药理作用  12-14
    1.3.1 植物多糖的免疫调节作用  13
    1.3.2 植物多糖的抗肿瘤作用  13
    1.3.3 植物多糖的降血糖、降血脂作用  13-14
    1.3.4 植物多糖的抗辐射作用  14
    1.3.5 植物多糖的抗菌、抗病毒作用  14
  1.4 植物多糖的研究进展  14-15
  1.5 植物糖醛酸的研究进展  15
  1.6 桑树的研究进展  15-16
  1.7 桑的次生代谢产物的药理作用  16-21
    1.7.1 桑树中黄酮类物质的药理作用  16-17
    1.7.2 桑中生物碱类的药理作用  17-18
    1.7.3 桑中酚类物质的药理作用  18-19
    1.7.4 桑树中多糖的药理作用  19-21
  1.8 研究目的和意义  21-22
第二章桑枝皮多糖的提取、纯化及含量分析  22-28
  2.1 实验试剂、材料及仪器  22-23
    2.1.1 仪器与设备  22
    2.1.2 试剂及材料  22-23
  2.2 桑枝皮多糖（MBBP）的提取与精制  23-24
  2.3 桑枝皮多糖含量的测定  24-26
    2.3.1 对照品溶液的制备  24
    2.3.2 标准曲线的制作  24-25
    2.3.3 多糖样品总糖含量的测定  25-26
  2.4 间羟基联苯法测糖醛酸含量  26
    2.4.1 标准曲线的制作  26
    2.4.2 多糖样品糖醛酸的测定  26
  2.5 多糖中蛋白质的含量  26-27
    2.5.1 标准曲线的制作  27
    2.5.2 多糖样品的蛋白含量测定  27
  2.6 结果与讨论  27
  2.7 本章小结  27-28
第三章桑枝皮多糖的理化性质与化学结构  28-44
  3.1 实验试剂、材料及仪器  28
    3.1.1 仪器与设备  28
    3.1.2 试剂及材料  28
  3.2 多糖的理化性质鉴定  28-29
    3.2.1 颜色、溶解性试验  28
    3.2.2 α-萘酚试验（Molish 反应）  28-29
    3.2.3 苯酚-硫酸试验  29
    3.2.4 茚三酮反应  29
    3.2.5 紫外光谱分析  29
  3.3 桑枝皮多糖的分子量测定  29
  3.4 桑枝皮多糖的单糖组成成分  29-31
    3.4.1 单糖和混合单糖标准溶液的配制  29-30
    3.4.2 桑枝皮多糖水解样品液的制备  30
    3.4.3 薄层层析法分析  30
    3.4.4 非衍生化HPLC 法分析  30
    3.4.5 气相色谱质谱分析  30-31
  3.5 糖醛酸的还原(Conrad 法)  31-32
  3.6 桑枝皮多糖的单糖连接方式  32-34
    3.6.1 高碘酸氧化  32-33
    3.6.2 Smith 降解  33
    3.6.3 甲基化分析  33
    3.6.4 红外光谱分析  33-34
    3.6.5 核磁共振分析  34
  3.7 结果与讨论  34-43
    3.7.1 桑枝皮多糖的颜色和溶解性  34
    3.7.2 桑枝皮多糖的化学特性  34
    3.7.3 桑枝皮多糖的纯度与分子量  34-35
    3.7.4 桑枝皮多糖的单糖组成成分分析  35-37
    3.7.5 桑枝皮多糖的单糖连接方式  37-43
  3.8 本章小结  43-44
第四章桑枝皮多糖的抗氧化活性  44-49
  4.1 实验试剂、材料及仪器  44
    4.1.1 试剂及材料  44
  4.2 总抗氧化能力测定（FRAP 法）  44-45
  4.3 还原力测定  45
  4.4 对羟自由基（?OH）的清除作用  45-46
  4.5 清除DPPH 自由基的试验  46
  4.6 结果与讨论  46-48
    4.6.1 总抗氧化能力  46
    4.6.2 桑枝皮多糖组分的还原力  46-47
    4.6.3 桑枝皮多糖组分对羟自由基（?OH）的清除作用  47-48
    4.6.4 桑枝皮多糖对DPPH 自由基的清除活性的分析  48
  4.7 本章小结  48-49
第五章全文结论及工作展望  49-51
  5.1 全文总结  49-50
  5.2 工作展望  50-51
参考文献  51-60
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文  60-61
附录一  61-62
致谢  62-63

桑枝皮多糖的制备、结构鉴定及其抗氧化活性分析

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