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胃肠安丸抗轮状病毒的实验研究

作　者: 张婧
导　师: 李晓眠
学　校: 天津医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 胃肠安丸轮状病毒噻唑蓝比色分析法血清药理学乳鼠
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨胃肠安丸体内外抗轮状病毒(Rotavirus, RV) SA11株的效果。方法1胃肠安丸体外抑制RV效果的研究：1.1采用组织细胞培养法,观察细胞病变效应(Cytopathic effect, CPE)和噻唑蓝比色分析法(MTT)检测胃肠安丸在恒源猴肾细胞(MA104)中对RV的作用。并通过不同的给药方式评价胃肠安丸对RV SA11株的预防作用、治疗作用和直接灭活作用。1.2运用血清药理学方法制备胃肠安丸含药血清,通过观察CPE及MTT方法检测大鼠服药后不同时间的含药血清抑制RV的效果。2胃肠安丸体内抑制RV效果的研究：观察3同龄乳鼠60只,将同一母鼠喂养的乳鼠分为不同的组,以排除母乳喂养可能造成的干扰。将60只乳鼠随机分为6组,每组10只,即正常对照组(A组)、病毒对照组(B组)、病毒唑治疗对照组(C组,即10倍临床常用剂量)、胃肠安丸高剂量组(D组,即30倍临床常用剂量)、胃肠安丸中剂量组(E组,即20倍临床常用剂量)、胃肠安丸低剂量组(F组,即10倍临床常用剂量)。除A组用50μ1 MA104细胞培养液灌胃而不用病毒灌胃外,其余5组均用胰酶活化、滴度(TCID50)为10-6.3的病毒悬液50μl灌胃,接种途径为自然吮吸,连续2天。感染病毒1h后,A、B组给予蒸馏水,治疗组分别给予胃肠安丸、病毒唑口服治疗,20μl/只,连续4天,各组均不给予其他药物治疗,均给予普通饲料及饮水。观察各组乳鼠的临床反应、生长发育和排毒情况。RV攻击后第4天随机处死各组乳鼠5只,留取血液和小肠标本,另外5只乳鼠继续观察临床症状。病毒感染前后检测大便轮状病毒抗原；心脏取血测定细胞因子TNF-α, IFN-γ;取脾脏做T、B淋巴细胞增殖试验；感染后第4天取小肠做HE染色观察小肠组织病理改变；采用免疫组化染色观察乳鼠空肠RV抗原分布；采用Tunel细胞凋亡原位检测RV是否引起小肠细胞凋亡；CPE法滴定乳鼠小肠中RV滴度。结果1胃肠安丸体外抑制RV效果1.1胃肠安丸对MA104细胞有预防作用、治疗作用、直接灭活作用。对RV的半数抑制浓度(50% inhibiting concentration, IC50)分别为0.261 mg/ml,0.269 mg/ml,0.114 mg/ml。治疗指数(Therapeutic index, TI)分别是4.79,4.67,10.96。1.2含胃肠安丸血清稀释度为1：16且在灌胃后45min～65 min,含药血清对RV呈现较好的抑制作用。2胃肠安丸体内抑制RV效果：胃肠安丸中剂量组中TNF-α及IFN-γ值与病毒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；胃肠安丸高剂量组的T、B淋巴细胞刺激指数与病毒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；HE染色显示胃肠安丸可减轻乳鼠小肠的病理变化；免疫组化显示胃肠安丸可有效抑制乳鼠小肠的RV SA11抗原的表达；CPE滴定乳鼠小肠中RV滴度显示胃肠安丸可降低小肠中RV滴度的作用。结论1胃肠安丸在体外具有抑制RV SA11株在MA104细胞病变发生的作用。2胃肠安丸在体内可以减轻RV引起的肠道病理性变化,有效抑制了乳鼠小肠的RV SA11抗原的表达,降低小肠中RV滴度的作用。结果显示,胃肠安丸在体内外均有抑制RV的作用,和减轻RV感染后的症状,为临床应用胃肠安丸治疗RV腹泻提供了理论的实验依据。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语  10-12
前言  12-15
  研究现状、成果  12-13
  研究目的、方法  13-15
一、胃肠安丸体外抑制RV效果的研究  15-26
  1.1 对象和方法  15-20
    1.1.1 材料  15-16
    1.1.2 方法  16-20
  1.2 结果  20-24
    1.2.1 病毒滴度  20
    1.2.2 SA11镜观察结果  20-21
    1.2.3 轮状病毒核酸(dsRNA)  21
    1.2.4 胃肠安丸对细胞毒性测定  21-22
    1.2.5 药物抗病毒的药效学研究  22-23
    1.2.6 血清药理学  23-24
  1.3 讨论  24-25
  1.4 小结  25-26
二、胃肠安丸体内抗RV的研究  26-38
  2.1 对象和方法  26-32
    2.1.1 材料  26-27
    2.1.2 方法  27-32
  2.2 结果  32-35
    2.2.1 SA11后乳鼠的临床表现及胃肠安丸干预结果  32
    2.2.2 乳鼠大便中RV Ag酶联免疫分析检测结果  32-33
    2.2.3 ELISA法检测血清中TNF-α及IFN-γ的检测结果  33
    2.2.4 T、B淋巴细胞增殖试验结果  33
    2.2.5 小肠组织病理切片HE染色结果  33-34
    2.2.6 免疫组化染色结果  34-35
    2.2.7 CPE法滴定乳鼠小肠中RV滴度  35
  2.3 讨论  35-37
  2.4 小结  37-38
结论  38-39
参考文献  39-43
发表论文和参加科研情况说明  43-44
综述轮状病毒感染研究现状  44-57
  综述参考文献  51-57
致谢  57

胃肠安丸抗轮状病毒的实验研究

内容摘要

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