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骨髓间充质干细胞对博莱霉素致小鼠肺纤维化的影响及作用机制研究

作　者: 康秀华
导　师: 张伟
学　校: 南昌大学
专　业: 呼吸内科学
关键词: 肺纤维化骨髓间充质干细胞羟脯氨酸转化生长因子-β1(TGF-β1) 干扰素-γ 白介素-4 sry性别决定区
分类号: R563.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:通过观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对博来霉素致小鼠肺纤维化动物模型的影响,探讨治疗肺纤维化的新方法。方法:体外分离、培养雄性6-8周C57BL/6J小鼠间充质干细胞。60只6-8周雌性C57BL/6J小鼠随机分为3组:阴性对照组(P组),阳性对照组(B组),BMSCs治疗组(B+M组)。P组于气管内注入PBS50μL,B组及B+M组按5μg/g剂量气管内注入博莱霉素50μL制备肺纤维化模型,B+M组于造模后6h经尾静脉注射BMSCs 1×107/ mL,200μL。实验第3,7,14,28天分别处死5只小鼠,收集小鼠肺泡灌洗液检测其细胞因子IFN-γ、IL-4的浓度;留取肺组织行病理HE染色,羟脯氨酸含量测定,提取肺组织RNA以检测TGF-β1mRNA、IFN-γmRNA、IL-4mRNA基因表达情况;提取肺组织的DNA检测雄鼠的性别决定基因(sry基因)。结果:1、肺组织病理:B+M组在第7、14天的肺泡炎较B组明显减轻,第28天肺纤维化程度较B组明显减轻。2、肺系数: B及B+M组各时间点肺系数均较P组稍高,但B+M组较B组明显降低。3、HYP含量:在3、7天,三组的HYP含量无明显差异; B+M组的HYP含量在第14天与P组相当,在28天稍高于P组,但均明显低于B组。4、TGF-β1mRNA:B及B+M组各时间点TGF-β1mRNA表达均较P组高,但在后三个时间点B+M组明显低于B组。5、sry基因检测:B+M组各时间点均有雄性小鼠的sry基因存在。6、肺组织IFN-γmRNA、IL-4mRNA表达情况:B及B+M组IFN-γmRNA、IL-4mRNA表达在四个时间点均明显高于P组,在后三个时间点B+M组IFN-γmRNA较B组明显偏低,在后两个时间点B+M组IL-4mRNA较B组明显偏低;比较IL-4mRNA/IFN-γmRNA,B+M组在后两个时间点明显低于B组。7、肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-4的浓度: B及B+M组IFN-γ、IL-4浓度在四个时间点均高于P组,但在后三个时间点B+M组IFN-γ浓度较B组明显偏低;且其IL-4浓度在四个时间点均较B组明显偏低;比较IL-4/IFN-γ浓度,B+M组在3,14,28天高于P组,在7、14、28天明显低B组(7、14天:P〈0.05;28天P=0.05)。结论:1、外源性BMSCs经尾静脉注射可以到达肺损伤部位,且可以长期存在;2、外源性BMSCs可以减轻肺泡炎、肺纤维化的程度;3、外源性BMSCs发挥抗炎、抗纤维化的可能是通过逆转Th1/Th2细胞因子的失衡实现的;4、外源性BMSCs到达损伤肺后可能抑制TGF-β1mRNA的表达,从而抑制纤维化形成。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
第1章前言  9-11
第2章实验材料  11-13
  2.1 实验动物  11
  2.2 实验仪器  11
  2.3 实验试剂  11-12
  2.4 其他  12-13
第3章实验方法与步骤  13-19
  第一部分骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定  13-16
    3.1 分离培养  13
    3.2 细胞传代  13-14
    3.3 细胞鉴定  14-16
  第二部分 BMSCs移植入博莱霉素肺损伤小鼠体内实验  16-19
    3.1 动物模型的置备  16
    3.2 实验分组  16
    3.3 标本收集  16
    3.4 各实验指标的检测方法  16-19
第4章统计学方法与实验结果  19-24
  4.1 统计方法  19
  4.2 实验结果  19-24
第5章讨论  24-30
第6章结论与展望  30-31
致谢  31-32
参考文献  32-35
附图  35-48
综述  48-55
攻读学位期间的研究成果  55

骨髓间充质干细胞对博莱霉素致小鼠肺纤维化的影响及作用机制研究

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