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利多卡因对LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5表达的影响

作　者: 曾悦翔
导　师: 徐道妙
学　校: 中南大学
专　业: 麻醉学
关键词: 利多卡因 AQP-5 肺泡Ⅱ型上皮细胞 ALI 肺泡液体清除
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：观察不同剂量利多卡因预处理对LPS诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5(Aquaporin-5, AQP-5)的影响,并对其可能机制进行初步探讨。方法：原代培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,随机分7组(n=6)：1.空白对照组；2.溶剂对照组(无水乙醇,0.4μl/ml); 3.LPS组;4. Lidol (2μl/ml)+LPS组;5.Lido2(20(μg/ml)+LPS组；6.Lido3(200μg/ml)+LPS组7.Lido3组(单纯Lido,终浓度为200μg/ml),LPS终浓度为1μg/ml,相应组加入LPS 10min前加入Lido,4h后ELISA检测上清液中TNF-α含量,RT-PCR及western blot检测各组细胞AQP-5mRNA及蛋白表达水平。结果：1. ELISA结果显示,空白对照组、溶剂对照组及Lido3组细胞上清液中TNF-α含量分别是(224.3±43.8),(222.6±34.4),(213.7±87.2),三组间无明显统计学意义(P>0.05)；与前面三组对照组比较,LPS组及Lido+LPS组TNF-α释放增加(P<0.05)；与LPS组比较,Lido+LPS组TNF-α释放减少(P<0.05),Lidol+LPS组、Lido2+LPS组、Lido3+LPS组组间TNF-α释放虽无明显统计学差异,但数值上呈现明显的剂量依赖性。2. RT-PCR结果显示,空白对照组、溶剂对照组及Lido3组均有AQP-5 mRNA表达,三者无明显差异(P>0.05)；前面三组对照组比较,LPS组及Lido+LPS组AQP-5 mRNA表达降低(P<0.05)；与LPS组比较,Lido+LPS组AQP-5 mRNA表达增加(P<0.05), Lidol+LPS组、Lido2+LPS组、Lido3+LPS组组间AQP-5 mRNA表达虽无明显统计学差异,但数值上呈现明显的剂量依赖性。3. Western blot结果显示,空白对照组、溶剂对照组及Lido3组均有AQP-5蛋白表达,三者无明显差异(P>0.05)；前面三组对照组比较,LPS组及Lido+LPS组AQP-5蛋白表达降低(P<0.05)；与LPS组比较,Lido+LPS组AQP-5蛋白表达增加(P<0.05),Lidol+LPS组、Lido2+LPS组、Lido3+LPS组组间AQP-5蛋白表达虽无明显统计学差异,但数值上呈现明显的剂量依赖性。结论：在LPS所致ALI细胞模型中,2-200μg/ml利多卡因预处理可上调肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-5 mRNA和蛋白表达,其机制可能与抑制TNF-α释放有关。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-11
缩略词表  11-12
前言  12-14
材料与方法  14-25
  1 实验材料  14-18
    1.1 实验动物  14
    1.2 主要试剂  14-17
    1.3 实验设备  17-18
  2 研究方法  18-25
    2.1 技术路线  18-19
    2.2 大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)原代培养及鉴定  19-20
    2.3 ALI细胞模型建立及分组  20
    2.4 酶联免疫法检测细胞上清液中TNF-α水平  20-21
    2.5 RT-PCR检测AQP5 mRNA表达水平  21-23
    2.6 Westem blot检测AQPS蛋白表达水平  23-24
    2.7 统计学分析  24-25
结果  25-31
  1 AT-Ⅱ培养及鉴定  25-27
    1.1 AT-Ⅱ产量和纯度(n=6)  25
    1.2 倒置显微镜下观察各时段AT-Ⅱ形态学特征及变化(见图1-1,图1-2)  25-26
    1.3 AKP染色(见图1-3,图1-4)  26
    1.4 大鼠AT-Ⅱ SP-A免疫细胞化学鉴定(见图1-5,图1-6)  26-27
    1.5 透射电子显微镜观察(见图1-7,图1-8)  27
  2. 利多卡因预处理对LPS诱导的AT-Ⅱ细胞释放TNF-α的影响  27-28
  3. 利多卡因预处理对LPS诱导的AT-Ⅱ细胞AQP-5 mRNA表达的影响  28-30
  4. 利多卡因预处理对LPS诱导的AT-Ⅱ细胞AQP-5蛋白表达的影响  30-31
讨论  31-37
  1. 原代大鼠AT-Ⅱ分离培养及鉴定  31-32
  2. ALI细胞模型复制  32
  3. AQPs与ALI  32-33
  4. 利多卡因与AQPs  33-37
结论  37-38
参考文献  38-43
综述  43-52
  参考文献  48-52
致谢  52-53
攻读学位期间主要的研究成果目录  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
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