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肝细胞生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞对扩心病大鼠心肌纤维化和凋亡的影响

作　者: 胡雨
导　师: 林明
学　校: 福建医科大学
专　业: 心血管内科学
关键词: 骨髓间充质干细胞 腺病毒载体 肝细胞生长因子 转染 心肌病心力衰竭 静脉移植 扩张型心肌病 心肌纤维化 心肌凋亡 基质金属蛋白酶
分类号: R542.21
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 59次
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内容摘要


第一部分观察hHGF基因修饰的MSCs对扩张型心肌病大鼠心功能的影响目的:移植肝细胞生长因子（hHGF）基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）到扩张型心肌病心力衰竭的大鼠体内,观察移植后对心功能的影响。方法:将构建好的Ad-hHGF进行体外扩增、测定病毒滴度;提取新鲜骨髓,分离、培养并鉴定MSCs;将带有hHGF基因的腺病毒载体感染第3-4代MSCs,荧光显微镜检观测转染效率。通过腹腔注射阿霉素制作SD大鼠心肌病心力衰竭模型,随机分为模型组、MSCs组、MSCs-hHGF组和正常对照组,每组8只,MSCs-hHGF组经尾静脉注射Ad-hHGF感染的MSCs 3x106/100ul,MSCs组注射MSCs 3x106/100ul,模型组和正常对照组注射磷酸盐缓冲液（PBS）各100ul;在移植后不同时间检测血浆hHGF蛋白;移植后4周,应用生理信号系统检测心功能.结果:病毒扩增后噬斑试验测定Ad-hHGF的滴度为1.3 x1010pfu/ml。Ad-GFP感染MSCs,感染率随感染复数（MOI）的增加而增加,当MOI值为100时,感染率达到99.3%。MSCs的流式细胞仪鉴定结果:CD90,CD44,CD34,CD11分别为97.70%,99.90%,2.08%,15.90%。与模型组相比,MSCs组和MSCs-hHGF组大鼠心功能明显改善:左室收缩峰压（LVSP）增加（p＜0.05）,左室舒张末期压（LVEDP）降低（p＜0.05）;MSCs-hHGF组较MSCs组心功能亦有明显提高:LVEDP（p＜0.05）,LVSP（p＜0.05）。MSCs-hHGF组大鼠血浆中可以检测到hHGF蛋白,第9天含量最高随后渐降。结论:1.MSCs可以作为通过腺病毒转染hHGF基因的理想载体细胞。2.MSCs经尾静脉移植可改善扩心病的心功能;Ad-hHGF修饰的MSCs较MSCs可进一步改善扩心病心功能;移植Ad-hHGF修饰的MSCs在体内可短期表达HGF。第二部分探讨hHGF基因修饰MSCs移植后对扩心病大鼠心肌纤维化和凋亡的影响目的:探讨肝细胞生长因子（hHGF）基因修饰MSCs移植后对阿霉素诱导的扩心病心衰大鼠心肌纤维化和凋亡的影响方法:尾静脉移植干细胞检测心功能后,苦味酸天朗猩红染色观察心肌胶原纤维的变化,偏振光显微镜观察Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维的改变:免疫组化检测左室心肌hHGF和MMP-1（基质金属蛋白酶-1）及TIMP-1（基质金属蛋白酶抑制因子-1）的表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果:（1）心肌天狼猩红染色示:与正常对照组相比,模型组胶原容积分数CVF明显增加（7.00±0.41%vs1.60±1.09%,,P＜0.01）;与模型组相比,MSC-hHGF组和MSCs组CVF皆显著降低（1.95.±0.27%vs 7.00±0.41%,P＜0.01;3.44±0.60%vs 7.00±0.41%,P＜0.05）;MSC-hHGF组和MSCs组之间也有明显差异（1.95.±0.27%vs 3.44±0.60%,P＜0.05）;偏振光显微镜观察到MSC-hHGF组和MSCs组Ⅰ型胶原比例较模型组显著降低（53.56±8.57%vs 78.45±11.32%,P＜0.01;66.35±10.01 vs 78.45±11.32%,P＜0.05）,MSC-hHGF组较MSCs组下降（53.56±8.57%vs 66.35±10.01%,P＜0.05）;同模型组相比,MSCs组MMP1含量显著高于扩心病组（p＜0.05）,而MSC-hHGF组高于MSC组（p＜0.05）;MSC组TIMP-1含量与模型组无差异,MSC-hHGF组较模型组降低（p＜0.05）（2） MSC-hHGF组中hHGF含量显著高于正常组（p＜0.01）,模型组及MSC组,后三组之间表达无差异（3）和模型组相比,MSC-hHGF组和MSC组心肌细胞凋亡率明显减小（14.52±2.78%vs 23.90±3.19%,p＜0.01;17.24±2.46%vs 23.90±3.19%,p＜0.05）,而MSC-hHGF组和MSC组间无明显差异。结论1,hHGF修饰的MSCs较MSCs能进一步抑制扩心病大鼠心肌组织纤维化,可能与hHGF激活基质金属蛋白酶有关。2,hHGF-MSCs组较MSCs组在抗扩心病大鼠心肌细胞凋亡上无明显差异。3,hHGF-MSCs组较MSCs组能够更大程度地提高扩心病心功能,可能与hHGF-MSCs更强的抑制心肌纤维化的能力有关,而与抑制心肌细胞凋亡无关。

全文目录


英文缩略词表  4-5
论文摘要(中文)  5-7
论文摘要(英文)  7-10
前言  10-11
第一部分  11-26
  一、材料与方法  11-17
  二、结果  17-23
  三、讨论  23-26
第二部分  26-40
  一、材料与方法  26-30
  二、结果  30-37
  三、讨论  37-40
总结  40-41
参考文献  41-45
致谢  45-46
综述  46-51
  参考文献  50-51

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 心脏疾病 > 心肌疾病 > 心肌炎
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