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新型抗菌剂在贻贝微生物控制中的应用

作　者: 黄朱梁
导　师: 裘迪红
学　校: 宁波大学
专　业: 水产品加工与贮藏工程
关键词: MIDI Sherlock系统 贻贝 抗菌 铁离子螯合剂 MTT实验
分类号: TS254.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 40次
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内容摘要


为了寻找新型抗菌剂,了解其抗菌效果及在水产品保鲜中的实际应用能力,本文对新合成的两种抗菌CP251和CP252的抗菌性能进行了研究,并和DTPA进行比较,同时将它们应用到贻贝的保鲜中。本文首先确定了MIDI Sherlock系统的最佳鉴定方法。接着用这种确定的最佳方法结合传统的生理生化鉴定方法对贻贝中存在的优势菌进行鉴定,选取贻贝中最为常见的腐败菌——枯草芽孢杆菌、典型的革兰氏阳性菌——金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌——铜绿假单胞菌对新型抗菌剂CP251和CP252的抗菌效果进行测定并和DTPA进行比较。然后对这三种抗菌剂进行MTT实验,并应用到贻贝的保鲜中去。MIDI Sherlock系统的鉴定结果显示,贻贝中以芽孢杆菌属和弧菌属为主;且当获菌量在10~0~120mg,并使用MIDI推荐的TSBA培养基时,鉴定的准确度——相似系数(similarity index, SI)最高,在0.802~0.805之间,远远大于系统的推荐值0.5。抑菌实验结果表明,DTPA和CP251对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑制效果要明显好于CP252。当CP251的浓度为450ppm和10~0ppm时,基本上已经完全抑制了金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的生长;而CP252在上述两个浓度时才使它们的菌液浓度下降了一个数量级。然而对于枯草芽孢杆菌,DTPA的抑制效果要远远超过CP251和CP252。DTPA在1500ppm时就使它的菌液浓度下降了四个数量级,从4.5×10~7 cfu/mL下降到1.4×10~3 cfu/mL;而CP251和CP252在3000ppm的时候才表现出明显的抑制作用。对这三种抗菌剂进行MTT实验后得知,它们对细胞的平均相对抑制率都不到10~%,分别是:DTPA为6.75%,CP251为3.05%,CP252为7.90%,将它们应用到贻贝的保鲜中,结果表明,DTPA的抑制效果最好,使贻贝中的菌落总数减少了69%,从9.4×10~4 cfu/mL下降到2.9×10~4 cfu/mL;CP251次之,它使贻贝中的菌落总数减少了一半左右,从9.4×10~4 cfu/mL下降到4.8×10~4 cfu/mL;CP252效果最差,减少的菌落总数不到20%。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
引言  9-10
1 绪论  10-19
  1.1 天然抗菌剂  10-12
    1.1.1 壳聚糖衍生物  10-11
    1.1.2 微生物类  11-12
  1.2 有机抗菌剂  12-15
    1.2.1 季铵盐类抗菌剂  12
    1.2.2 季鏻盐抗菌剂  12-13
    1.2.3 其他  13-15
  1.3 无机抗菌剂  15-16
    1.3.1 银系抗菌剂  15-16
    1.3.2 纳米 TiO_2 抗菌剂  16
  1.4 微生物鉴定的研究现状  16-18
  1.5 贻贝保鲜的研究  18
  1.6 本课题的研究思路和路线  18-19
2 MIDI 微生物自动鉴定系统鉴定方法的建立  19-32
  2.1 材料  19-21
    2.1.1 菌株  19
    2.1.2 试剂及配制  19-21
    2.1.3 仪器与设备  21
  2.2 方法  21-27
    2.2.1 Sherlock 鉴定系统鉴定蜡样芽孢杆菌  21-25
    2.2.2 传统生理生化鉴定蜡样芽胞杆菌  25
    2.2.3 不同培养基对蜡样芽胞杆菌MIDI 鉴定结果影响实验  25
    2.2.4 不同取量对蜡样芽胞杆菌MIDI 鉴定结果影响实验  25
    2.2.5 PCR 菌种鉴定方法鉴定蜡样芽胞杆菌  25-27
  2.3 结果与讨论  27-32
    2.3.1 MIDI 鉴定系统推荐方法的鉴定蜡样芽胞杆菌结果  27-28
    2.3.2 不同培养基对蜡样芽胞杆菌MIDI 鉴定结果的影响  28-29
    2.3.3 不同取菌量对蜡样芽胞杆菌MIDI 鉴定结果的影响  29
    2.3.4 蜡样芽胞杆菌的生理生化鉴定  29-30
    2.3.5 PCR 鉴定蜡样芽胞杆菌结果  30
    2.3.6 讨论  30-32
3 贻贝中优势菌的分离与鉴定  32-38
  3.1 材料、仪器及试剂的配制  32-33
    3.1.1 材料与仪器  32
    3.1.2 试剂的配制  32-33
  3.2 方法  33
    3.2.1 贻贝中优势菌的分离  33
    3.2.2 贻贝中优势菌的生理生化鉴定  33
    3.2.3 贻贝中优势菌的MIDI 方法鉴定  33
  3.3 结果与讨论  33-38
    3.3.1 贻贝中优势菌的分离结果  33-34
    3.3.2 贻贝中优势菌的生理生化鉴定  34-36
    3.3.3 贻贝中优势菌的MIDI 微生物自动鉴定系统鉴定结果  36
    3.3.4 讨论  36-38
4 新型抗菌剂抗菌效果的研究  38-46
  4.1 材料与试剂的配制  38
    4.1.1 材料  38
    4.1.2 试剂的配制  38
  4.2 主要仪器与设备  38-39
  4.3 方法  39-40
    4.3.1 CP251、CP252 和DTPA 对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌抑制曲线的测定  39
    4.3.2 滤纸片实验  39-40
  4.4 结果与讨论  40-46
    4.4.1 结果  40-41
    4.4.2 讨论  41-46
5 新型抗菌剂的细胞毒实验  46-55
  5.1 细胞培养前的准备工作  47-48
    5.1.1 清洗  47-48
    5.1.2 消毒  48
  5.2 试剂的配制  48-51
  5.3 材料与方法  51-52
    5.3.1 材料  51
    5.3.2 方法  51-52
  5.4 结果与讨论  52-55
6 新型抗菌剂在贻贝保鲜中的应用  55-59
  6.1 材料与方法  55-57
    6.1.1 材料  55
    6.1.2 方法  55-57
  6.2 结果与讨论  57-59
    6.2.1 结果  57
    6.2.2 讨论  57-59
7 结论  59-60
  7.1 结论  59
  7.2 展望  59-60
参考文献  60-65
在学研究成果  65-66
致谢  66

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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 水产加工工业 > 水产食品加工与保藏
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