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犬瘟热DNA疫苗的构建及免疫实验的研究

作　者: 张召兴
导　师: 刘清河
学　校: 吉林农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 犬瘟热病毒表达和鉴定貉子
分类号: S858.292
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

犬瘟热病毒(CDV)属于副粘病毒科(family Paramyxoviridae)麻疹病毒属(genus Morbillivirus)成员,为有囊膜的负链线性RNA病毒,自然条件下犬瘟热病毒感染食肉目中犬科、鼬科、浣熊科等多种动物,猫科动物也可感染。是当前对养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的疾病之一。防治犬瘟热的有效途径是疫苗接种,虽然灭活疫苗和弱毒疫苗在控制犬瘟热发生上起了一定作用,但随着使用的广泛,也发现了许多缺陷,弱毒苗可引起免疫抑制和中枢神经系统的损坏;随着CDV宿主谱日趋扩大,弱毒疫苗的使用还可能致死某些易感动物并带来散毒的危险。此外,CDV本身的变异也可能导致疫病的流行。因此,必须寻找更安全、有效、实用的新型疫苗。基因疫苗和重组活载体疫苗是近年来研究比较热的新型疫苗,在预防免疫方面也取得很大进展。最新研究表明CDV融合蛋白(F)和血凝素(H)蛋白是宿主免疫系统的主要目的抗原,是产生中和抗体的重要抗原之一。核衣壳(N)蛋白是保守性较强的免疫原性蛋白,此外N蛋白上含有T细胞表位。H,F和N蛋白在犬瘟热的免疫预防方面起重要作用。为了研制新一代安全、高效的CDV基因工程疫苗,本研究根据GeneBank已发表的犬瘟热病毒H、F和N基因序列,设计四对特异引物,经RT-PCR扩增后,连接到pMD18-T载体,序列测定证明各基因序列正确。然后将各基因亚克隆到真核表达载体pIRES1neo中,构建成四种重组真核表达质粒,经过Western—blot鉴定证明各重组质粒可以表达相应的目的蛋白。之后以构建的真核表达质粒pIRES H、pIRES F、pIRES N1和pIRES N2为基因疫苗,进行了小鼠和貉子的动物免疫试验,对免疫鼠和貉子体内免疫应答水平进行了ELISA检测,并对貉子进行了攻毒保护实验。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠和貉子产生特异性免疫应答反应,虽然貉子在经过三次基因免疫后仍不能完全抵抗强度攻击(保护率为33%到100%不等),但弱毒疫苗也有貉子攻毒后死亡,不能对貉子产生完全的保护。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
第一章前言  8-18
  1 我国犬瘟热的流行现状与研究现状  9-13
  2 犬瘟热的免疫与预防  13-18
第二章 ELISA方法诊断犬瘟热的建立  18-23
  1 材料与方法  18-20
  2 结果  20-22
  3 小结  22-23
第三章犬瘟热基因免疫真核表达质粒的构建  23-32
  1 材料与方法  23-28
  2 结果  28-31
  3 小结  31-32
第四章小白鼠实验  32-34
  1 材料与方法  32-33
  2 结果  33
  3 小结  33-34
第五章貉子实验  34-38
  1 材料与方法  34-36
  2 结果  36-37
  3 小结  37-38
第六章讨论  38-41
第七章结论  41-42
参考文献  42-46
致谢  46-47
作者简介  47

犬瘟热DNA疫苗的构建及免疫实验的研究

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