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转群体感应淬灭基因attM烟草抗青枯病的研究

作　者: 牛毅
导　师: 范加勤；王克荣
学　校: 南京农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 青枯病 转基因烟草 群体淬灭 分子检测 抗病性鉴定
分类号: S435.72
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


烟草是我国重要的经济作物之一。烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum E. F. Smith)引起的一种细菌性病害,属于典型的维管束病害。细菌从烟株根部侵入,通过一些生化、增殖活动来损坏寄主的维管束输导组织,导致植株失水,一旦发病,全株都会枯萎死亡。烟草青枯病已经成为影响烟草产量和质量的严重病害。植物病原细菌毒性基因的表达受群体感应(quorum-sensing,简称QS)信号分子的调控。通过降解细菌产生的AHL信号分子,猝灭其群体感应,能够降低细菌的致病力。本研究旨在将attM基因转入烟草,检测转基因烟草对青枯菌抗性的变化,以期为将群体猝灭基因应用于抗青枯病转基因植物的培育奠定基础。获得的结果如下：①通过PCR的方法,从土壤根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105中扩增得到青枯菌AHL信号分子降解酶编码的群体淬灭基因口ttM,将其连接到双元表达载体pBI121上,构建成重组转基因载体pBI-attM。并将此重组载体通过冻融法转化至土壤根癌杆菌EHA105中,挑选阳性克隆供转化烟草。②由农杆菌EHA105介导的叶盘法将含有nptⅡ基因的重组表达质粒pBI-attM转化烟草,对存活的愈伤组织进行编号和扩繁。以各抗性愈伤分化得到的烟草为材料,进行PCR、PCR-Southern、RT-PCR、荧光定量PCR和GUS染色检测及nptⅡ基因的ELISA显色分析,结果表明,attM基因已整合到烟草基因组中并在各转基因株系中均显著表达。③以野生型烟草和转pBI121空载体转化的烟草为对照,对转基因烟草分别进行了抗烟草青枯病的离体及活体检测实验,表明转attM基因烟草植株对于青枯菌引起的青枯病有明显的抗性。本研究将能够引起细菌抗性的群体感应淬灭基因口ttM转化到植物中,对借助转基因方法控制烟草青枯病具有重要意义。

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 农作物病虫害及其防治 > 经济作物病虫害 > 烟草病虫害
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