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原子力显微镜研究骨髓来源的树突状细胞

作　者: 王炯坤
导　师: 邢飞跃
学　校: 暨南大学
专　业: 免疫学
关键词: 原子力显微镜骨髓细胞树突状细胞超微结构粗糙度粘附力
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:利用原子力显微镜(AFM)研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导培养的骨髓源性未成熟与成熟树突状细胞(DC)的超微结构及其细胞膜的机械性质。方法:建立GM-CSF体外诱导培养小鼠骨髓来源DC的模型,并联合运用光学显微镜和AFM观察骨髓细胞的形态学变化。通过免疫磁珠法分选CD11c阳性的DC,并将分选得到的DC分为对照组、Jagged-1组和LPS组。运用荧光标记单克隆抗体染色技术结合流式细胞仪检测各组DC成熟的表面标记MHCⅡ的表达水平,以及ELISA方法检测DC上清液中IL-12的表达水平。联合运用SEM和AFM观察未成熟和成熟DC的超微结构,并通过AFM检测未成熟和成熟DC的细胞大小及其细胞膜的粗糙度与粘附力大小。结果:第6天,GM-CSF诱导培养的骨髓细胞具有明显分化现象,主要是聚集成团的圆形或椭圆形半贴壁细胞和分散的长梭形贴壁细胞组成。LPS组中MHCⅡ阳性的细胞数量大幅增加,并且该组上清液中IL-12的含量显著高于对照组和Jagged-1组,表明DC经LPS刺激后获得功能性成熟。SEM的扫描结果证实,对照组和Jagged-1组的DC细胞比较小且细胞的突触少而短,而LPS刺激组的DC细胞比较大且具有丰富的长的突触,表明DC经LPS刺激后获得形态上的成熟。AFM对未成熟和成熟DC形态的观察结果基本与SEM吻合,但AFM图像中DC细胞膜的皱缩以及突触的收缩比较不明显,表明AFM技术对细胞超微结构的破坏程度更小。AFM的数量化分析显示,成熟DC在细胞膜的粗糙度和粘附作用方面均显著大于未成熟DC。结论:比起SEM,AFM对细胞的损伤更小,可以观察到更清晰和完整的细胞膜超微结构,是一种适合观察类似DC这种具有突触结构的细胞技术。成熟DC细胞膜表面更加粗糙,而且粘附能力更强,表明DC分化导致的细胞骨架重组对其细胞膜的超微结构及表面机械性质都具有较大影响,为DC成熟提供新的依据。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
目录  7-9
一前言  9-17
  1 原子力显微镜  9-14
  2 树突状细胞  14-17
二材料与方法  17-21
  1 动物  17
  2 主要试剂  17
  3 主要仪器  17
  4 主要溶液的配制  17-18
  5 骨髓细胞的配制  18
  6 骨髓源DC的诱导与分选  18-19
  7 流式细胞仪检测  19
  8 细胞因子检测  19
  9 扫描电镜观察  19
  10 AFM检测  19-20
  11 统计学处理  20-21
三结果  21-31
  1 GM-CSF诱导骨髓细胞的分化  21-22
  2 LPS刺激树突状细胞成熟  22-24
  3 树突状细胞的扫描电子显微镜观察  24-25
  4 树突状细胞的原子力显微镜观察  25-28
  5 树突状细胞的粗糙度分析  28-29
  6 树突状细胞的粘附力分析  29-31
四讨论  31-34
五小结  34-35
参考文献  35-44
附录一英文缩略词表  44-45
附录二攻读硕士研究生期间发表论文及工作情况  45-46
致谢  46

原子力显微镜研究骨髓来源的树突状细胞

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