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紫草素逆转人绒癌耐药细胞JAR/MTX多药耐药性的实验研究

作　者: 任威
导　师: 李巨
学　校: 吉林大学
专　业: 妇产科学
关键词: 绒毛膜癌多药耐药甲氨喋呤耐药逆转紫草素细胞培养
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

绒癌是一种恶性滋养细胞肿瘤,通过化疗治愈率可达80%-90%,但是多药耐药的发生及肿瘤的复发仍是绒癌患者死亡的主要原因。甲氨喋呤(MTX)是治疗绒癌的首选药物之一,但获得性耐药严重。因此,有效地控制多药耐药的发生及复发已成为绒癌治疗的关键。目前开发的耐药逆转剂的毒性限制了其临床应用,由于多药耐药机制的复杂性,使得仅仅抑制、阻断单个耐药机制不足以消除MDR。中药资源丰富、作用靶点多,寻找新的高效、低毒的抗肿瘤药物及中药逆转剂已成为目前耐药肿瘤研究的重点。本研究根据多药耐药产生的分子机制,通过MTT法检测紫草素对JAR/MTX的耐药逆转作用、应用Western blot、RT-PCR方法检测BCRP与P-gp蛋白及mRNA的表达、流式细胞术检测Hochest33342及Rh123在细胞内荧光值强度的变化,进一步研究紫草素体外逆转绒癌JAR/MTX耐药机制。结果发现:紫草素对绒癌耐药细胞JAR/MTX有耐药逆转作用,其机制可能为下调BCRP蛋白和mRNA的表达或下调P-gp的活性,从而增加细胞内药物浓度。临床上可通过检测BCRP的表达及P-gp的活性来检测绒癌细胞是否对MTX耐药,作为一种新型的中药逆转剂,紫草素有可能成为治疗耐药绒癌的一种新的手段。因此,本实验研究为绒癌耐药患者的治疗提供了新的线索。

全文目录

提要  4-7
中英文缩略词对照表  7-8
第1章前言  8-11
第2章材料与方法  11-20
  1 实验材料  11-12
    1.1 药品  11
    1.2 细胞株  11
    1.3 主要试剂  11-12
    1.4 主要仪器设备  12
  2 实验方法及观察指标  12-19
    2.1 细胞培养  12
    2.2 MTT 法检测紫草素对 JAR/MTX 的耐药逆转作用及确定紫草素的耐药逆转浓度  12-14
      2.2.1 MTT 法求得 JAR、JAR/MTX 之 MTX、紫草素半数致死量 IC50  13
      2.2.2 MTT 法求得 JAR/MTX+选定的紫草素耐药逆转浓度 C之 MTX 半数致死量 IC50  13-14
    2.3 应用 Western blot 方法在蛋白水平观察紫草素、MTX 及两药联合时 BCPR 及 P-gp 表达水平,RT-PCR 在转录水平观察紫草素、MTX 及两药联合时 BCPR 及 P-gp mRNA 表达水平  14-18
      2.3.1 实验分组  14
      2.3.2 应用 Western blot 方法在蛋白水平观察紫草素、MTX及两药联合时 BCPR 及 P-gp 表达水平  14-15
      2.3.3 应用 RT-PCR 方法在转录水平观察紫草素、MTX 及两药联合时 BCPR 及 P-gp mRNA 表达水平  15-18
    2.4 流式细胞仪检测细胞内Hochest33342及Rh123的潴留情况  18-19
  3 统计学方法  19-20
第3章结果  20-25
  1 紫草素对 JAR/MTX 的药物逆转作用  20
  2 紫草素、MTX及两药联合应用时JAR及JAR/MTX细胞BCPR及P-gp 表达水平  20-22
  3 紫草素、MTX及两药联合应用时JAR及JAR/MTX细胞BCPR及P-gp mRNA 表达水平  22-23
  4 流式细胞术检测两株细胞在加与不加紫草素时细胞内底物荧光值强度的变化  23-25
第4章讨论  25-31
  1 紫草素对绒癌耐药细胞 JAR/MTX 的耐药逆转作用  25-26
  2 紫草素逆转绒癌耐药细胞 JAR/MTX 对 MTX 的耐药与 BCPR 的关系  26-29
  3 紫草素逆转绒癌耐药细胞 JAR/MTX 对 MTX 的耐药与 P-gp 的关系  29-31
第5章结论  31-32
第6章参考文献  32-37
第7章攻读学位期间发表的学术论文  37-38
后记和致谢  38-39
摘要  39-43
Abstract  43-48

紫草素逆转人绒癌耐药细胞JAR/MTX多药耐药性的实验研究

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