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中国卤虫不同发育时期的差异蛋白组学研究

作　者: 李妍
导　师: 侯林
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 中国卤虫差异蛋白蛋白组学双向电泳技术质谱分析
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

中国卤虫(Artemia sinica)属于节肢动物门(Arthropoda),甲壳纲(Crustacea),鳃足亚纲(Branchiopoda),无甲目(Anostaca),卤虫科(Artemiidae),卤虫属(Artemia)。主要分布于山西、西藏、新疆、青海、内蒙等内陆盐湖、盐井等高盐水体中,卤虫卵是水产育苗的优质活诱饵。近几年来,随着基因组计划的完成为生命科学研究提供了广阔的平台,但是,生命的复杂性和多样性表明,仅对遗传信息载体一基因组进行研究,还远不能对生命活动的机理做出全面的解释。因此,要对复杂的生命活动有全面的认识,必然要在蛋白质水平上对生物体进行深入的研究。卤虫蛋白质组学作为后基因组研究的重要内容之一,也逐渐成为了人们研究的热点。本研究在建立了高质量的蛋白质组学研究平台的同时,还对卤虫胚胎在不同发育组织时期的蛋白质构成进行了调查研究。本文利用蛋白组学方法,主要研究卤虫胚胎发育不同时期的蛋白质差异表达,利用双向电泳技术分离不同时期的卤虫蛋白质,并运用ImageMaster 2D Elite(Version5.0)软件对双向电泳图谱进行分析得到0h、5h、10h、15h、20h五个时期的差异蛋白斑点的分子量,等电点及蛋白相对含量,分析所得0h、5h、10h、15h、20h五个时期的差异蛋白斑点有明显的差异,0h时期的差异蛋白斑点数为18个,5h时期的蛋白斑点数为26个,10h时期的蛋白斑点数为23个,15h时期的蛋白斑点数为16个,20h时期的蛋白斑点数为14个,并呈现先上调后下调的趋势。并选取明显的10个蛋白差异斑点进行胶内酶解消化,得到的短肽片段,通过基质质谱辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDLI-TOF/MS)进行鉴定,将结果输入NCBInr数据库进行匹配、比较,推测可能的蛋白质。质谱鉴定和生物信息学分析发现这10个蛋白可大致分为热激蛋白、氧化还原酶、其他未知蛋白等四类。在蛋白质表达水平上,0h、5h、10h、15h、20h五个时期的蛋白存在显著差异,并且这些差异蛋白可能与胚胎发育有关。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
1 前言  7-24
  1.1 卤虫的生物学特征和分布  7-10
  1.2 卤虫生物学研究进展  10-20
    1.2.1 卤虫发育相关基因研究进展  10-12
    1.2.2 卤虫发育相关蛋白研究进展  12-18
    1.2.3 卤虫分子生物学研究  18-19
    1.2.4 卤虫的经济价值  19-20
  1.3 蛋白组学的研究  20-24
    1.3.1 蛋白组学的研究历史  21-22
    1.3.2 蛋白组学的研究方法  22-23
    1.3.3 蛋白质组学的应用  23-24
  1.4 卤虫蛋白质组学研究意义  24
2 材料与方法  24-31
  2.1 材料  24-28
    2.1.1 卤虫孵化及培养条件  24-25
    2.1.2 主要试剂及配置  25-28
  2.2 方法  28-31
    2.2.1 卤虫总蛋白的制备  28-29
    2.2.2 第一向载体两性电解质等电聚焦pH 梯度等电聚焦电泳  29
    2.2.3 第二向 SDS-PAGE 凝胶电泳  29-30
    2.2.4 蛋白染色检测  30
    2.2.5 凝胶图像的采集与数据分析  30-31
    2.2.6 质谱检测  31
3. 结果  31-49
  3.1 蛋白标准曲线绘制  31
  3.2 卤虫总蛋白的电泳结果  31-36
  3.3 卤虫蛋白双向电泳图谱及软件分析  36-41
  3.4 蛋白斑点检测结果分析  41-49
4. 讨论  49-54
  4.1 中国卤虫不同发育时期的总蛋白 SDS 凝胶电泳差异条带分析  49
  4.2 双向电泳差异蛋白斑点图谱分析  49-50
  4.3 中国卤虫差异蛋白斑点质谱鉴定  50-52
  4.4 实验条件优化  52-54
    4.4.1 总蛋白提取条件的优化  52
    4.4.2 影响卤虫样品双向电泳质量的关键因素条件优化  52-54
5. 结论  54-57
  5.1 建立了高质量的卤虫蛋白质组学的研究平台体系  54-55
  5.2 卤虫胚胎组织双向电泳研究分析  55
  5.3 利用 MALDI-TOF-MS 技术对卤虫差异蛋白的功能分析  55-57
参考文献  57-66
致谢  66

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