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基于ISSR分子标记的蜡梅遗传多样性研究

作　者: 叶丽娟
导　师: 杨秋生
学　校: 河南农业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 蜡梅表型多样性遗传多样性 ISSR
分类号: S685.99
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

蜡梅为我国特产的优良冬季香花树种,分布广,栽培历史悠久,品种繁多。本文采用形态特征和ISSR分子标记对29个蜡梅品种材料进行了蜡梅花部表型多样性和遗传多样性分析,旨在为蜡梅品种选育、蜡梅品种分类、系统与进化生物学研究提供理论基础。主要研究结果如下:1.对29份蜡梅材料进行了花部形态特征的观察记载,从中选取11个性状进行主成分分析,得出“中被片长度”、“内被片紫纹”、“花径”、“花色”是蜡梅品种分类中的重要的特征因子。对蜡梅ISSR反应体系进行了优化,建立了适合蜡梅ISSR扩增的体系和程序。该反应体系(总体积为20μl)如下:10×扩增缓冲液2μl(Tris-Cl 200mmol/L PH 8.3, KCl 500mmol/L, 0.5%Triton-X 100),1.6μl Mg2+ (25mmol/L),0.6μl dNTPs (dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10umol/L引物2.0μl,1.5 UTaq聚合酶,DNA模板约30 ng。扩增反应程序为:94℃预变性5min,再进入38个PCR循环(94℃变性1 min,52～59℃退火1 min,72℃延伸1 min),最后72℃延伸10 min,4℃保存。扩增产物用2%琼脂糖凝胶进行电泳分析。3.应用10个ISSR引物对29份蜡梅材料进行了ISSR扩增,获得了75条可统计的条带,其中多态性条带38条,多态性条带比率为50.7%。平均观测等位基因数为1.5325,平均有效等位数为1.2956,平均Nei’s基因多样性指数为0.1873,平均Shannon信息指数0.2321遗传多样性水平较高。

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致谢 4-7摘要 7-8引言 8-9第一章文献综述 9-21 1.1 蜡梅研究概况 9-13 1.1.1 种质资源分布及群落生态学研究 9 1.1.2 蜡梅繁殖研究 9-10 1.1.3 孢粉学及传粉生物学研究 10 1.1.4 花芽分化 10 1.1.5 成分分析 10-11 1.1.6 分子水平研究 11 1.1.7 应用研究 11-13 1.2 蜡梅品种分类研究现状 13-21 1.2.1 我国花卉品种分类现状 13-14 1.2.2 我国蜡梅品种分类概况 14-21第二章蜡梅花部表现型多样性研究 21-30 1 蜡梅品种分类的主要形态依据 21-22 1.1 花色(特指中、外花被片颜色) 21 1.2 内被片颜色 21 1.3 花径 21-22 1.4 花型 22 1.5 花期 22 1.6 中被片形状 22 1.7 花被片数 22 2. 材料 22-24 3 试验方法 24-27 3.1 花部性状的选取与编码 24 3.2 性状记载 24-27 4 结果与分析 27-29 4.1 表型标记聚类分析 27-28 4.2 主成分分析 28-29 5. 讨论 29-30第三章基于 ISSR 标记的蜡梅遗传多样性研究 30-41 1 蜡梅 ISSR-PCR 反应体系的优化 30-36 1.1 材料及试剂 30 1.2 方法 30-32 1.3 结果与分析: 32-35 1.3.1 DNA 提取结果与检测 32-33 1.3.2 退火温度的确定 33 1.3.3 数据处理与表观分析 33-34 1.3.4 影响 ISSR—PCR 反应因素的差异显著性 34-35 1.4 讨论 35-36 2 29 份蜡梅材料的 ISSR 标记研究 36-41 2.1 试验材料 36 2.2 实验方法 36-38 2.3 结果与分析 38-41参考文献 41-43附表 43-45英文摘要 45

基于ISSR分子标记的蜡梅遗传多样性研究

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