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CD200/CD200R1在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达及作用研究

作　者: 王艳侠
导　师: 田新平；张烜；李永哲；赵丽丹
学　校: 北京协和医学院
专　业: 内科学
关键词: 系统性红斑狼疮 CD200 CD200R
分类号: R593.241
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景和目的CD200与其受体CD200R均是免疫球蛋白超家族成员,同属Ⅰ型跨膜糖蛋白。CD200广泛表达于机体胸腺细胞、活化的T细胞、B细胞、滤泡树突状细胞、神经元、血管内皮细胞、肾小球细胞、黄体颗粒细胞、滋养层细胞及平滑肌细胞等多种细胞上。CD200R1是CD200的主要受体,主要表达于机体髓系细胞(包括巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞、单核细胞、肥大细胞等)和CD4+T细胞上。CD200与其受体CD200R1结合可以发挥免疫抑制作用,在防止机体炎症反应过度、移植排斥、自发性流产及自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用。目前对CD200-CD200R信号通路在自身免疫性疾病中的作用研究尚局限于胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)、实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)、实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(experimental autoimmune uveoretiniti, EAU)等动物模型,以及对肥大细胞和巨噬细胞功能影响方面的研究。对其在人体内的生物学功能的研究尚少,在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)中的作用罕有报道。在本实验室的前期研究工作中发现SLE患者体内CD200 mRNA和CD200R1 mRNA的表达较健康对照显著下降。本实验通过测定SLE患者外周血各细胞亚群中CD200、CD200R1的蛋白表达和血清中游离CD200的表达情况,并就重组人CD200 Fc融合蛋白、CD200R1Fc融合蛋白及人CD200R1亲和纯化多克隆抗体(anti-CD200R1)等CD200信号激活/阻断分子对SLE患者外周血T辅助细胞亚群分化和CD4+T淋巴细胞增殖的影响进行初步研究,从而为深入探讨CD200/CD200R信号通路在SLE发病机制中的作用提供依据。方法明确诊断的SLE患者74人,同期选取年龄性别相匹配的健康对照43人,采集抗凝外周静脉血分离单个核细胞。流式细胞术检测外周血PBMC中CD200、CD200R1在T淋巴细胞、B淋巴细胞、树突状细胞(DC)、单核细胞及NK细胞上的表达。ELISA方法检测外周血血清中游离CD200的水平。SLE患者和健康对照PBMC与CD200 Fc、CD200R1 Fc及anti-CD200R1共培养48小时,胞内细胞染色流式细胞术测定T辅助细胞亚群中Th1、Th2、Th17及Treg的比例变化。PBMC经CFSE标记后分别给予激活或阻断CD200信号通路的CD200 Fc. CD200R1 Fc或anti-CD200R1共培养96小时,同时给予PHA、抗CD3/CD28刺激细胞增殖,流式细胞术检测细胞增殖情况。结果一、CD200在外周血各淋巴细胞亚群上的表达百分率(%)1.CD200在外周血CD3+T淋巴细胞上表达百分率(%)：SLE患者较健康对照升高(8.694±3.220 vs.6.340±2.439,P<0.01)。其中：CD200在外周血CD3+CD4+T细胞亚群上的表达(%)：SLE患者较健康对照升高(10.607±3.529 vs.7.549±2.957, P<0.01)。CD200在外周血CD3+CD8+T细胞亚群上的表达(%)：SLE患者与健康对照未见明显差异(2.788±1.526 vs.2.706±1.118,P=0.838)。2.CD200在外周血CD19+B淋巴细胞上的表达(%)：SLE患者与健康对照未见明显差异(54.323±14.837 vs.59.887±9.593,P=0.198)。3.CD200在外周血树突细胞上的表达(%)：CD200在外周血CD11c+CD123-髓样树突状细胞(mDC)上的表达(%)：SLE患者与健康对照未见明显差异(4.977±1.737 vs.4.743±2.355,P=0.761)。CD200在外周血CD11c-CD123+浆样树突状细胞(pDC)上的表达(%)：SLE患者与健康对照未见明显差异(14.084±4.337 vs.12.394±5.240, P=0.351)。4.CD200在外周血CD14+单核细胞上的表达(%)：SLE患者与健康对照未见明显差异(6.984±5.434 vs.14.185±13.395,P=0.054)。5.CD200在外周血CD16+CD56+NK细胞上的表达(%)：SLE患者与健康对照未见明显差异(1.025±0.831 vs.0.662±0.253,P=0.135)。二、CD200R1在外周血各淋巴细胞亚群上的表达百分率(%)1.CD200R1在外周血CD3+T淋巴细胞上表达百分率(%)：SLE患者较健康对照降低(7.481±3.606 vs.12.703±4.869,P<0.01)。其中,CD200R1在外周血CD3+CD4+T细胞亚群上的表达(%)：SLE患者较健康对照降低(10.906士4.931 vs.18.448士5.423, P<0.01).CD200R1在外周血CD3+CD8+T细胞亚群上的表达(%)：SLE患者较健康对照降低(5.073±2.673 vs.7.489±4.502,P<0.05)。2. CD200R1在外周血CD19+B淋巴细胞上的表达(%)：SLE患者与健康对照未见明显差异(11.300±12.643 vs.6.341±9.768,P=0.281)。3. CD200R1在外周血树突细胞上的表达：CD200R1在外周血CD11c+CD123髓样树突状细胞(mDC)上的表达(%)：SLE患者较健康对照降低(45.239±12.808 vs.56.822±13.693,P<0.01)。CD200R1在外周血CD11c-CD123+浆样树突状细胞(pDC)上的表达(%)：SLE患者较健康对照明显降低(46.196±19.459 vs.72.125±10.173,P<0.001)。4. CD200R1在外周血CD14+单核细胞上的表达(%)：SLE患者较健康对照明显降低(37.665±11.815 vs.68.661±8.437,P<0.001)。5.CD200R1在外周血CD16+CD56+NK细胞上的表达(%)：SLE患者与健康对照未见明显差异(27.781±1.319 vs.37.456士26.314, P=0.256).三、外周血血清中游离CD200的表达SLE患者血清中游离CD200的水平较健康对照明显增高(306.60±72.63pg/ml vs.109.48±23.39pg/ml,p=0.001),经免疫抑制治疗后下降至正常(140.32±31.58pg/ml),与治疗前相比p<0.001。四.CD200 Fc.CD200R1 Fc及anti-CD200R1对T辅助细胞亚群比例的影响CD200信号分子CD200 Fc.CD200R1 Fc及anti-CD200R1对SLE患者和健康对照T辅助细胞亚群比例的影响均较小,未见明显差异。五.CD200 FcCD200R1 Fc及anti-CD200R1对CD4+T细胞增殖的影响CD200 Fc或CD200R1 Fc对SLE患者和健康对照CD4+T细胞自发增殖和PHA或抗CD3/CD28刺激下的增殖均无明显影响。但在SLE患者可以观察到anti-CD200R 1增强抗CD3/CD28刺激PBMC增殖作用的现象。结论CD200R1在SLE患者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞、单核细胞、pDC及mDC上的表达均较健康对照降低。SLE患者外周血CD4+T细胞上的CD200和血清中的游离CD200增高,经过激素和免疫抑制药物治疗后下降至正常。CD200 Fc.CD200R1 Fc和anti-CD200R 1对SLE患者和健康对照者外周血T辅助细胞亚群比例的影响较小。体外增殖实验中,使用anti-CD200R 1阻断CD200信号传导后可以促进SLE患者抗CD3/CD28刺激下的CD4+T细胞增殖。提示CD200-CD200R信号通路异常可能在SLE的发病机制中发挥着一定作用。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
前言  11-13
第一部分 系统性红斑狼疮患者外周血CD200及CD200R的表达情况研究  13-29
  背景和目的  13
  实验材料  13-15
  实验方法  15-17
  实验结果  17-29
第二部分 CD200 Fc、CD200R1 Fc和anti-CD200R1对T辅助细胞亚群的影响  29-38
  背景和目的  29
  实验材料  29-31
  实验方法  31-34
  实验结果  34-38
第三部分 CD200 Fc、CD200R1 Fc和anti-CD200R1对T细胞增殖的影响  38-43
  背景和目的  38
  实验材料  38-39
  实验方法  39-41
  实验结果  41-43
讨论  43-47
结论  47-48
参考文献  48-52
论文综述  52-63
  参考文献  58-63
附录1:缩略词表  63-64
附录2:ACR修订SLE分类标准  64-65
附录3:SLE疾病活动性指数(SLEDAI)  65-67
附录4:SLE患者基本临床资料  67-70
致谢  70-71

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病 > 红斑狼疮 > 系统型红斑狼疮
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