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低浓度Aβ（1-42）单体/寡聚体及一氧化碳供体对SN56细胞存活率的影响

作　者: 金曼
导　师: 吕佩源
学　校: 河北医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 阿尔茨海默病 Aβ(1-42) 一氧化碳 CORM-2 细胞培养 SN56细胞存活率
分类号: R749.16
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是一种神经退行性疾病,以认知功能障碍和记忆缺失为主要临床表现,成为目前危害老年人健康的重要疾病,且其发病率有逐年升高的趋势。1906年AD的典型临床表现和病理特征被Alois Alzheimer第一次系统清晰地描述,但到现在,人们对AD确切病因的认识仍不完全。AD以脑内β-淀粉样多肽（Beta-amyloid peptide, Aβ）在老年斑中的不规则自发组装、沉积和神经纤维缠结为主要特点。其中Aβ（1-42）是受损脑内老年斑的主要淀粉样成分,表明其在淀粉样神经退行性改变和相关的AD神经行为损害中的关键作用。容易引起AD发病的Aβ（1-42）的存在形式及浓度存在很多争议,也是近年来国内外研究的重点。内生性一氧化碳（Carbon monoxide, CO）是体内一种重要的化学递质,在某些细胞类型中可以起到抗细胞凋亡的作用,而它在神经细胞中的作用尚待明确。最近,转换型金属羰基复合物已被确认为一种潜在的一氧化碳释放分子（Carbon monoxide releasing molecules, CORMs）,因为其拥有将CO传递到周围组织和器官,而易化CO药理作用的能力。它含有CO和一系列重金属,如钴、铁、镍、钌等。由这些金属释放的CO可以受到光激活、温度、PH值和周围环境的调节。三羰基三氯代钌二聚物（Tricarbonyldichlororuthenium （II） dimer）,已经被证实为CORMs新家族中的一员,通常被称为——CORM-2。大量研究证实,它可以对某些细胞起到抗凋亡的作用,因此目前已经被当做一种有效的CO供体,广泛的应用于实验研究中。目的:1通过观察低浓度的Aβ（1-42）单体/寡聚体对SN56细胞存活率的影响,来了解SN56细胞对低浓度Aβ（1-42）的易感性。2通过观察Aβ（1-42）单体/寡聚体与不同浓度的CO供体——CORM-2共同作用下SN56的细胞存活率的变化,来了解CORM-2能否对胆碱能SN56细胞起到保护作用。方法:1细胞培养SN56细胞培养于37℃,95%空气,5%CO2环境中。以浓度为0.05%的EDTA-Ca²⁺胰蛋白酶消化传代。将传代后的细胞以相同浓度种植于96-孔细胞培养板中,待其充分增殖及贴壁后（3天左右）,在1mM双丁酰环磷酰胺（cAMP）及1μM视磺酸（RA）环境中分化3天,得到分化的SN56细胞。2分组将细胞分为四组,分别为:对照组、Aβ（1-42）组、Aβ（1-42）+CORM-2 50μM组、Aβ（1-42）+CORM-2 100μM组。将96-孔板的前三列设为空白对照组,不加任何处理因素,其余每列按顺序分别加入Aβ（1-42） 10nM、Aβ（1-42） 100nM、Aβ（1-42） 1μM、Aβ（1-42） 10nM+CORM-2 50μM、Aβ（1-42） 100nM+CORM-2 50μM、Aβ（1-42） 1μM+CORM-2 50μM、Aβ（1-42） 10nM+CORM-2 100μM、Aβ（1-42） 100nM+ CORM-2 100μM、Aβ（1-42） 1μM+CORM-2 100μM。培养3天后对各组进行细胞存活率的测定。3 MTT法检测细胞存活率96-孔板每孔加MTT溶液11μl。然后在CO2温箱孵育3小时。每孔加入异丙醇和氯化氢的混合液111μl,反复抽吸混匀放置2-5min。以570nm波长测定各孔光吸收值,记录并标化成细胞死亡率。4统计方法实验结果用x±s表示,数据处理采用SPSS13.0统计软件,多个独立样本的比较进行Kruskal-Wallis检验,两相关样本比较进行Wilcoxon检验,P<0.05有统计学意义。结果:单纯Aβ（1-42）组细胞存活率分别为（79.73±0.94）%、（67.99±0.79）%、（60.42±0.62）%,随Aβ（1-42）浓度增加而下降。Aβ（1-42）与CORM-2 50μM共同作用后,细胞存活率为（75.15±0.096）%、（63.20±0.17）%、（55.33±0.19）%,分别比单纯Aβ（1-42）组存活率下降。Aβ（1-42）与CORM-2 100μM共同作用后细胞存活率分别为:（73.20±0.27）%、（64.34±0.11）%、（54.17±0.12）%,较单纯Aβ（1-42）组降低,但与Aβ（1-42）+CORM-2 50μM组比较,其降低细胞存活率的作用存在差异。结论:低浓度Aβ（1-42）单体/寡聚体可降低SN56细胞的存活率,并且浓度越高,效果越明显,表明其对SN56细胞的作用与浓度密切相关;不同浓度的CORM-2均可以使SN56细胞的存活率下降,并且作用强度存在差异。因此,可以认为一定浓度的CORM-2并没有对SN56细胞起到保护作用,而是加重了细胞的死亡,但CORM-2的作用强度与剂量的关系有待于进一步明确。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-10
英文缩写  10-12
前言  12
材料与方法  12-15
结果  15-17
附图  17-19
附表  19-20
讨论  20-28
结论  28
参考文献  28-34
综述一  34-44
  参考文献  40-44
综述二  44-51
   参考文献  49-51
致谢  51-52
个人简历  52

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