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脾酪氨酸激酶Syk在食管癌中的表达及对其生物学特征影响的研究

作　者: 张倩
导　师: 单保恩；艾军
学　校: 河北医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 脾酪氨酸激酶 食管鳞状细胞癌 Piceatannol 基质金属蛋白酶 甲基化
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:恶性肿瘤是严重影响人类生命健康的一类疾病,其发病率呈逐年上升趋势,死亡率居各种疾病之首。肿瘤的发生是一个多因素、多步骤、多基因参与的复杂病理过程,涉及到多种癌基因的激活、抑癌基因的失活和其他调节因子的失调。超过50%的原癌基因和癌基因产物都具有蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)活性。脾酪氨酸激酶(Spleen Tyrosine Kinase,Syk)是一种非受体型蛋白酪氨酸激酶,广泛表达于造血细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等细胞,在细胞信号转导中发挥着重要作用。近年的研究认为Syk对多种腺上皮来源的肿瘤生长和转移有抑制作用,但对其在鳞癌中的作用研究较少。本研究拟对Syk在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况进行研究,并初步探讨Syk对食管癌细胞生物学性状的影响。方法:1采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例食管鳞癌组织、27例食管鳞癌癌旁组织及30例正常食管黏膜组织中Syk mRNA的表达。免疫组化技术法检测39例食管鳞癌组织、27例食管鳞癌癌旁组织及38例正常食管黏膜组织中Syk蛋白的表达。分析Syk蛋白表达与临床病理学指标间的关系。2用RT-PCR和Western-blot方法检测四种食管癌细胞株(Yes-2、Eca-109、TE-13和TE1)Syk的表达情况。3给予不同浓度(0、10、50μmol/L)的Syk选择性抑制剂Piceatannol处理Syk阳性表达的TE-1细胞,观察Syk基因的表达变化;通过细胞划痕实验观察处理后细胞迁移能力的改变;采用RT-PCR法分析MMP-2、MMP-9的表达变化。4 Syk基因甲基化状态检测:提取TE-1和Yes-2细胞DNA,经亚硫酸盐修饰纯化后,行甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR, MSP)检测Syk启动子区的甲基化情况。结果:1 RT-PCR检测结果显示,在30例食管鳞癌、27例食管鳞癌癌旁组织和30例正常食管黏膜组织中,食管癌组织Syk mRNA表达量高于癌旁和正常黏膜组织,统计学分析表明,三组间Syk mRNA的表达差异无统计学意义。经抗Syk单抗进行免疫组化染色,Syk蛋白阳性反应为棕黄色颗粒,定位于细胞浆。结果显示在食管鳞癌组织中34例Syk蛋白表达阳性(34/39, 87.2%),癌旁组织18例表达阳性(18/27, 66.7%),正常食管黏膜组织中26例表达阳性(26/38, 68.4%),食管癌组织Syk蛋白表达高于食管癌旁组织和正常食管黏膜组织,三组间Syk蛋白表达差异具有统计学意义(P<0.05)。Syk蛋白表达与食管鳞癌患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期差异均无统计学意义(P均>0.05)。2用RT-PCR和Western-blot方法检测四种不同食管癌细胞株,结果显示Syk基因和蛋白在食管癌细胞株TE1细胞中表达阳性,在Yes-2细胞中表达阴性,Eca-109、TE-13细胞表达为弱阳性。3 Syk表达阳性的TE-1细胞在给予不同浓度(0、10、50μmol/L)Syk选择性抑制剂Piceatannol处理后,表达逐渐减弱;并且细胞迁移和侵袭能力逐渐恢复;MMP-2和MMP-9的表达逐渐上调。4 MSP结果显示,TE-1细胞中未发现Syk基因启动子甲基化,Yes-2细胞中发现有Syk基因Syk基因启动子甲基化。结论:1 Syk基因和蛋白在食管鳞癌组织中表达增高,但Syk蛋白表达与临床病理学指标无关。2 Syk表达下调可能参与了食管癌细胞的迁移、侵袭;且其启动子区cpG岛的甲基化参与了食管癌细胞的基因调控。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
引言  9-10
第一部分 脾酪氨酸激酶 Syk 与食管鳞状细胞癌的关系  10-27
  前言  10
  材料与方法  10-15
  结果  15-17
  附图  17-21
  附表  21-23
  讨论  23-25
  小结  25
  参考文献  25-27
第二部分 Syk 表达对食管癌细胞生物学特征影响的研究  27-48
  前言  27
  材料与方法  27-35
  结果  35-37
  附图  37-41
  附表  41-42
  讨论  42-45
  小结  45
  参考文献  45-48
结论  48-49
综述  49-61
  参考文献  56-61
致谢  61-62
个人简历  62
  一、一般情况  62
  二、个人经历  62
  三、发表论文  62
  四、获奖情况  62

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 食管肿瘤
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