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人CD80-IgG1Fc融合蛋白的表达、鉴定及其诱导的抗肿瘤效应
作 者: 李频
导 师: 章涛；陈敏
学 校: 福建医科大学
专 业: 免疫学
关键词: CD80 IgG1 Fc 融合蛋白 肿瘤免疫 肝癌细胞
分类号: R392
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 24次
引 用: 0次
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内容摘要
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目的:构建人CD80-IgG1Fc融合蛋白的真核表达载体,并转染CHO细胞,建立CHO融合蛋白稳定表达株;探讨经融合蛋白修饰的肝癌细胞H22对淋巴细胞抗肿瘤免疫的影响,及其对肝癌细胞H22皮下移植型荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。方法:通过RT-PCR从人外周血单个核细胞中扩增CD80膜外段及IgG1Fc基因,构建真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),将其转染CHO细胞株并筛选。通过RT-PCR、Western blot及ELISA鉴定融合基因的表达;将融合蛋白修饰小鼠肝癌细胞株H22,流式细胞术检测细胞膜上CD80的表达,以MTT比色法、乳酸脱氢酶释放试验检测经修饰的H22细胞对脾淋巴细胞增殖及其细胞毒性的影响。建立肝癌细胞H22皮下移植型荷瘤小鼠模型后,接种经融合蛋白修饰的H22细胞,观察其对肿瘤生长的影响。结果:成功构建了真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并获得稳定表达CD80-IgG1Fc融合蛋白的重组CHO细胞株。针对融合蛋白修饰后的H22细胞,脾淋巴细胞增殖较对照组增强,CTL的细胞毒活性增高。荷瘤小鼠接种经融合蛋白修饰的H22细胞后,皮下肿瘤体积在第12天小于对照组。结论:CD80 -IgG1Fc融合蛋白能在CHO细胞中稳定表达;用CD80 -IgG1Fc融合蛋白修饰的H22细胞能促进淋巴细胞活化,诱导特异性抗肿瘤免疫效应,并对体内肿瘤生长有抑制作用。
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全文目录
中文摘要 4-5
英文摘要 5-7
前言 7-9
第一部分 人CD80-IgG1Fc 融合蛋白的表达及鉴定 9-26
一、材料、仪器和方法 9-21
二、结果 21-23
三、讨论 23-26
第二部分 融合蛋白修饰的H22 细胞诱导淋巴细胞抗肿瘤免疫作用 26-35
一、材料、仪器和方法 26-30
二、实验结果分析 30
三、结果 30-32
四、讨论 32-35
第三部分 融合蛋白对肝癌细胞H22 皮下移植型荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 35-39
一、材料、仪器和方法 35-36
二、实验结果分析 36
三、结果 36-37
四、讨论 37-39
结论 39-40
参考文献 40-44
综述 44-51
参考文献 47-51
致谢 51
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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