学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
PKDL通道的酸反应特性的电生理研究
作 者: 赵杰
导 师: 罗建红;杨巍
学 校: 浙江大学
专 业: 神经生物学
关键词: PKD2L1 PKD1L3 酸通道 膜片钳 全细胞记录
分类号: Q42
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 19次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
背景和目的:TRPP是TRP家族中重要的一个亚家族。人们发现PKD2突变后会导致常染色体多囊肾疾病(ADPKD, autosomal dominant polycystic kidney disease)后,因此命名了TRPP。TRPP亚家族包括PKD1、PKD2、PKD2L1、PKD1L3、PKD2L2等等。其中的PKD1/PKD2形成的受体-通道复合物,是与细胞的机械敏感性紧密相联的。而TRPP的另外两个成员PKD1L3和PKD2L1组成的通道复合物与PKD1和PKD2组成的通道复合物非常相似,2006年有三个研究小组均在国际知名杂志发表论文,认为PKD1L3和PKD2L1是对酸味敏感的感受体。此文中的PDKL通道就指的是PKD1L3和PKD2L1组成的通道。在发现PKDL通道的对酸反应后,杨巍和陈培华首先验证了共同表达PKD1L3和PKD2L1后产生的内向电流不是一个延迟反应,而是一个off响应。然后研究off响应与给酸和撤酸溶液的pH的关系,最后还研究了off响应的Ca2+依赖性。尽管酸通道的具体编码酸味觉的机制还不是很清楚,但本文尝试着用电生理和工程学的一些方法对此进行一些解读。实验方法:HEK293细胞培养于含10%胎牛血清和1%双抗的DMEM培养基中,3-4天传代一次,传代后24小时左右转染。转染时使用脂质体Lipofectamine2000 (Invitrogen),一般每35 mm培养皿,加入3-4μg质粒。将GFP. PKD1L3和PKD2L1共同转染到HEK293细胞中,室温下(22-25℃)对转染后24-48小时的HEK293细胞在电压钳模式下进行全细胞膜片钳记录。用Multiclamp700A放大器(Axon, USA)和pCLAMP系统软件(Version 9.0, Axon, USA)进行电信号的放大以及数据的记录和分析。数据采集接口为Digidata 1322A (Axon, USA),采样频率为10 kHz,1 kHz滤波。将种在小玻片的细胞放置在持续灌流细胞外液(ECS)的记录槽中进行实验。HEK293细胞的钳制电压为-60 mV。不同外液进行切换时,采用快速溶液切换系统RSC-160 (Biologic Science Instruments,France)完成。结果:1.撤酸后的不同pH对off电流的衰减时间的影响没有明显差异。2.胞外Ca2+浓度对off电流的衰减时间有较大的影响。胞外Ca2+浓度0mM时,衰减时间可以近二十秒,而当Ca2+浓度达到10 mM以及以上时,衰减时间则小于5秒。3.胞内Ca2+浓度也对off电流的衰减时间有较大的影响。含有0.5 mM EGTA的内液产生的off电流从峰值返回基线最快,均小于1秒,而含有10 mM BAPTA的内液产生的电流衰减时间很长,可达到6秒左右,含有5 mM EGTA的内液的电流的衰减时间居中。它们三者之间有统计学显著差异,*p<0.05。4.单独转染PKD2L1、PKD2均在给酸后有ofp向应。结论:PKDL通道的off电流不仅与所给酸的pH值有关,而且与撤酸后的pH值有关。PKDL通道受胞内外Ca2+浓度调节。单独转染PKD2L1、PKD2均在给酸后有off响应。
|
全文目录
致谢 4-5 摘要 5-7 Abstract 7-10 1 引言 10-17 2 材料和方法 17-23 2.1 实验器材 17 2.2 实验药品 17-18 2.3 实验溶液 18-20 2.4 其它 20 2.5 实验方法 20-23 3 实验结果 23-32 3.1 回到不同PH外液(pH=5,7.5,10)的全细胞电流 23-24 3.2 胞外钙浓度对OFF电流的影响 24-26 3.3 胞内钙浓度对OFF电流的影响 26-28 3.4 单转PKD2L1、PKD1L3的电流 28-30 3.5 PKD1/PKD2共转 30 3.6 PKD2单转 30-32 4 讨论 32-34 5 主要结论 34-35 参考文献 35-37 综述 37-48 References 44-48 作者简历及在读期间所取得的科研成果 48
|
相似论文
- 基于细胞电生理模型的膜片钳实验仿真平台设计与实现,R318.0
- 大鼠皮层神经细胞膜离子通道电流测量与重构,Q42
- 纳洛酮对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响,R965
- 孕期高盐对胎羊肠系膜动脉血管细胞钾离子通道的影响,R714.2
- 对IVM影响大鼠P2X4离子通道失活效应的研究,Q25
- 糖尿病胃轻瘫大鼠胃Cajal间质细胞钙通道和细胞内游离钙离子的变化,R587.2
- 基于Qt/E的嵌入式膜片钳系统设计,TP368.1
- 小鼠胚胎心肌细胞ATP敏感性钾通道(KATP)的发育依赖性研究,Q25
- 芹菜素与槲皮素的结构修饰及5-PBDMA对hERG钾通道的影响,R285
- 水通道4敲除对小鼠急性应激行为的影响及其机制,R965
- 基于嵌入式技术的膜片钳数据采集系统硬件设计,TP274.2
- 初探延迟整流钾电流与药源性心律失常的关系,R595.3
- 抗心肌Na~+/Ca~(2+)交换体α-1_(138-177)和α-2_(840-877)多克隆抗体的制备及其功能研究,R392
- ROS和离子通道在eATP调控蚕豆气孔运动过程中的作用,Q945
- 钆对新生大鼠大脑皮层神经元钾通道的调控作用,Q42
- 阿米洛利对大鼠下丘神经元上GABA_A受体的调控作用,R96
- 1.穴居狼蛛粗毒的生物学活性研究 2.海南捕鸟蛛毒素-Ⅶ和敬钊缨毛蛛毒素-Ⅳ的电生理活性研究,Q51
- 中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响,R285.5
- 中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜瞬时外向钾电流(I_(to))的影响,R285.5
- 大承气汤有效成分大黄素和厚朴酚对大鼠小肠Cajal间质细胞电压依赖性钾电流影响,R285.5
中图分类: > 生物科学 > 生理学 > 神经生理学
© 2012 www.xueweilunwen.com
|